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A fam&#237;lia IFN tipo III &#233; composta por IFN&#8208;&#955;1 &#40;IL&#8208;29&#41;&#44; IFN&#8208;&#955;2 &#40;IL&#8208;28A&#41; e IFN&#8208;&#955;3 &#40;IL&#8208;28B&#41;&#46; Muitos investigadores demonstraram que a IL&#8208;29 desempenha um papel importante na patog&#234;nese de muitos tipos de doen&#231;as autoimunes e inflamat&#243;rias&#44; como esclerose sist&#234;mica&#44; artrite reumatoide e l&#250;pus eritematoso sist&#234;mico&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0135"><span class="elsevierStyleSup">5&#8211;7</span></a> Entretanto&#44; a associa&#231;&#227;o de IL&#8208;29 com a psor&#237;ase vulgar &#40;PV&#41; ainda &#233; pouco compreendida&#46; Assim&#44; neste estudo&#44; comparamos os n&#237;veis s&#233;ricos de IL&#8208;29 em pacientes com PV&#44; dermatite at&#243;pica e em controles saud&#225;veis&#46;</p><p id="par0015" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Mais recentemente&#44; pesquisas indicaram que a IL&#8208;29 pode afetar a produ&#231;&#227;o de citocinas ao ativar o transdutor de sinal&#47;Janus Kinase e ativadores da via de transcri&#231;&#227;o&#46; A IL&#8208;29 regulou positivamente a express&#227;o de IL&#8208;1&#946;&#44; IL&#8208;8&#44; MCP&#8208;1 e promoveu a migra&#231;&#227;o de mon&#243;citos&#47;macr&#243;fagos na s&#237;ndrome de Simpson&#8208;Golabi&#8208;Behmel em humanos&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0150"><span class="elsevierStyleSup">8</span></a> A IL&#8208;29 pode aumentar a produ&#231;&#227;o de IL&#8208;10&#44; IL&#8208;8 e IL&#8208;6 em macr&#243;fagos e inibir a libera&#231;&#227;o de IL&#8208;13 em c&#233;lulas T&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0155"><span class="elsevierStyleSup">9&#8211;11</span></a> Al&#233;m disso&#44; He et al&#46; relataram que a IL&#8208;29 poderia induzir a secre&#231;&#227;o de IL&#8208;6 e TNF das c&#233;lulas T CD14&#43;&#44; bem como IL&#8208;4 e IL&#8208;13 dos mast&#243;citos&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0170"><span class="elsevierStyleSup">12</span></a> Os queratin&#243;citos&#44; sendo c&#233;lulas importantes na imunidade inata&#44; desempenham um papel importante na inflama&#231;&#227;o cut&#226;nea e na resposta imune por meio da express&#227;o de citocinas e pept&#237;deos antimicrobianos na psor&#237;ase&#46; As c&#233;lulas HaCat s&#227;o um tipo de linhagem celular de queratin&#243;citos&#46; Para estudar o papel da IL&#8208;29 na patog&#234;nese da PV&#44; investigamos neste estudo os efeitos da IL&#8208;29 na express&#227;o do mRNA de citocinas &#40;incluindo IL&#8208;6&#44; TNF&#8208;&#945;&#44; IL&#8208;17&#44; IL&#8208;8&#44; IL&#8208;4&#44; IFN&#8208;&#947; e IL&#8208;10&#41; em c&#233;lulas mononucleares de sangue perif&#233;rico &#40;CMSP&#41; de pacientes com PV e na linhagem celular de queratin&#243;citos HaCaT&#46;</p></span><span id="sec0010" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0045">M&#233;todos</span><span id="sec0020" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0050">Pacientes</span><p id="par0025" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Quarenta e um pacientes com PV&#44; 23 pacientes com dermatite at&#243;pica &#40;DA&#41; e 38 controles pareados por idade e g&#234;nero foram inclu&#237;dos neste estudo&#46; A hist&#243;ria detalhada de cada paciente &#233; fornecida na <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabela 1</a>&#46; A gravidade da doen&#231;a em pacientes com PV ou DA foi determinada pelo &#205;ndice de &#193;rea e Gravidade da Psor&#237;ase &#40;PASI&#44; Psoriasis Area and Severity Index&#41; ou pelo escore da DA &#40;SCORAD&#44; Scoring Atopic Dermatitis&#41;&#46; Entre eles&#44; 17 pacientes com PV foram tratados com esteroide t&#243;pico e alcatr&#227;o e composto oral com glicirrizina &#40;cada comprimido cont&#233;m glicirrizina 25<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg&#44; glicirrizinato de monoam&#244;nio 35<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg&#44; glicina 25<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg e DL&#8208;metionina 25<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg&#41;&#46; Os pacientes foram tratados com uma dose de dois comprimidos por vez&#44; tr&#234;s vezes&#47;dia&#46; Nippon Kayaku&#44; T&#243;quio&#44; Jap&#227;o&#46; As amostras de soro desses pacientes foram coletadas antes e depois do tratamento&#46; Al&#233;m disso&#44; amostras de sangue heparinizado foram coletadas de 16 pacientes com PV&#46; N&#227;o havia qualquer hist&#243;ria de infec&#231;&#245;es virais recentes&#44; linfocitose ou linfopenia&#44; ou qualquer outra investiga&#231;&#227;o correspondente nesses pacientes&#46; Todos os pacientes com PV tinham rigorosamente PV somente&#44; sem qualquer sobreposi&#231;&#227;o de outros fen&#243;tipos&#46;</p><elsevierMultimedia ident="tbl0005"></elsevierMultimedia></span><span id="sec0025" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0055">Ensaio para n&#237;veis s&#233;ricos de IL&#8208;29</span><p id="par0030" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os n&#237;veis s&#233;ricos de IL&#8208;29 em diferentes grupos de pacientes foram medidos por kits de ensaio imunoenzim&#225;tico ELISA &#40;Enzyme&#8208;Linked Immunosorbent Assay&#41; comercialmente dispon&#237;veis &#40;Boster&#44; Wuhan&#44; China&#41; seguindo as instru&#231;&#245;es do fabricante&#46;</p></span><span id="sec0030" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0060">Cultura de c&#233;lulas</span><p id="par0035" class="elsevierStylePara elsevierViewall">As CMSP de pacientes com PV foram isoladas do sangue perif&#233;rico coletado por centrifuga&#231;&#227;o de gradiente de densidade utilizando kits comercialmente dispon&#237;veis &#40;Tianjin Haoyang Biological Manufacture Co&#46; Ltd&#46;&#44; Tianjin&#44; China&#41;&#46; As CMSP isoladas de cada paciente foram divididas em dois grupos e cultivadas em DMEM contendo 10&#37; de FBS&#44; 100<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg&#47;mL de penicilina e estreptomicina em placa de seis po&#231;os com 1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mL&#47;po&#231;o&#46; Um grupo de c&#233;lulas foi tratado com 100 ng&#47;mL de IL&#8208;29 recombinante &#40;Peprotech&#44; Londres&#44; RU&#41; por 6 horas&#44; e o outro grupo foi tratado com PBS como controle&#46; Ap&#243;s o tratamento&#44; o RNA total foi extra&#237;do com o reagente Trizol &#40;Invitrogen Corp&#44; Carlsbad&#44; CA&#44; EUA&#41; de acordo com as instru&#231;&#245;es do fabricante&#46;</p><p id="par0040" class="elsevierStylePara elsevierViewall">As c&#233;lulas HaCaT foram cultivadas em DMEM contendo 10&#37; de FBS&#44; 100<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg&#47;mL de penicilina e estreptomicina e tratadas com IL&#8208;29 recombinante &#40;1 ng&#47;mL&#44; 10 ng&#47;mL&#44; 100 ng&#47;mL&#44; 1000 ng&#47;mL&#41; ou TNF&#8208;&#945; &#40;10 ng&#47;mL&#41; por 2 horas&#46; As c&#233;lulas foram tratadas com PBS como controle&#46; Ap&#243;s o tratamento&#44; o RNA total das c&#233;lulas foi extra&#237;do com o reagente Trizol de acordo com as instru&#231;&#245;es do fabricante&#46;</p></span><span id="sec0035" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0065">PCR quantitativa em tempo real</span><p id="par0045" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os n&#237;veis de mRNA de IL&#8208;6&#44; TNF&#8208;&#945;&#44; IL&#8208;17&#44; IL&#8208;4&#44; IFN&#8208;&#947;&#44; IL&#8208;10 e GAPDH em CMSP ap&#243;s incuba&#231;&#227;o com IL&#8208;29 ou PBS e a express&#227;o de IL&#8208;6&#44; IL&#8208;8 e GAPDH em c&#233;lulas HaCat ap&#243;s incuba&#231;&#227;o com IL&#8208;29&#44; TNF&#8208;&#945; ou PBS foram determinados por PCR quantitativa em tempo real&#46; O cDNA foi sintetizado a partir do RNA total utilizando o kit de reagentes RT com gDNA Eraser &#40;Takara&#44; Dalian&#44; China&#41;&#46; As amostras de cDNA foram amplificadas em um volume de rea&#231;&#227;o de 20<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L contendo 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L de 2&#215; SYBR Green Master Mix &#40;Takara&#44; Dalian&#44; China&#41;&#44; 2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L de cDNA e 0&#44;25<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;M de primers qPCR&#46; Foram utilizados os seguintes primers&#58; IL&#8208;4 &#40;P216616&#44; Bioneer&#44; Inc&#46;&#44; Daejeon&#44; Coreia&#41;&#59; IL&#8208;6 &#40;P211161&#44; Bioneer&#44; Inc&#46;&#44; Daejeon&#44; Coreia&#41;&#59; IL&#8208;10 &#40;P285360&#44; Bioneer&#44; Inc&#46;&#44; Daejeon&#44; Coreia&#41;&#59; IL&#8208;17 &#40;P291322&#44; Bioneer&#44; Inc&#46;&#44; Daejeon&#44; Coreia&#41;&#59; IFN&#8208;&#947; &#40;Cat&#225;logo&#58; HQP009467&#44; GeneCopoeia&#44; EUA&#41;&#59; TNF&#8208;&#945; &#40;P237423&#44; Bioneer&#44; Inc&#46;&#44; Daejeon&#44; Coreia&#41;&#59; GAPDH &#40;5&#8217;&#8208;CGGAGTCAACGGATTTGGTC&#8208;3&#8217; e 5&#8217;&#8208;CGGTGCCATGGAATTTGCCA&#8208;3&#8217;&#41;&#46; As condi&#231;&#245;es foram 95<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#176;C por 5 minutos&#44; e 95<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#176;C por 15 segundos e 60<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#176;C por 30 segundos de 40 ciclos com uma extens&#227;o final a 72<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#176;C por 5 minutos&#46; Os n&#237;veis de mRNA de IL&#8208;6&#44; TNF&#8208;&#945;&#44; IL&#8208;17&#44; IL&#8208;4&#44; IFN&#8208;&#947;&#44; IL&#8208;10 e IL&#8208;8 foram expressos como n&#237;veis relativos de mRNA em compara&#231;&#227;o com o controle e determinados pelo m&#233;todo 2&#8208;&#916;&#916;Ct&#46;</p></span><span id="sec0040" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0070">An&#225;lise estat&#237;stica</span><p id="par0050" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Cada experimento foi realizado pelo menos tr&#234;s vezes&#46; Os dados foram expressos como m&#233;dia &#177; DP&#46; As diferen&#231;as estat&#237;sticas entre os grupos foram determinadas de acordo com a an&#225;lise de vari&#226;ncia unilateral&#44; teste <span class="elsevierStyleItalic">t</span> de Student ou teste U de Mann&#8208;Whitney&#46; Os dados pareados foram comparados pelo teste <span class="elsevierStyleItalic">signed&#8208;rank</span> de Wilcoxon&#46; A associa&#231;&#227;o da IL&#8208;29 com os escores PASI foi analisada pelo teste de Spearman&#59; p &#60; 0&#44;05 foi definido como estatisticamente significativo&#46;</p></span></span><span id="sec0045" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0075">Resultados</span><span id="sec0050" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0080">N&#237;veis s&#233;ricos elevados de IL&#8208;29 em pacientes com PV</span><p id="par0055" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os n&#237;veis s&#233;ricos de IL&#8208;29 em pacientes com PV e DA e controles foram detectados por ELISA&#46; Como mostrado na <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0005">figura 1</a>A&#44; os n&#237;veis s&#233;ricos de IL&#8208;29 em pacientes com PV &#40;41&#44;62 &#177; 23&#44;26 ng&#47;mL&#41; foram significativamente maiores do que aqueles em pacientes com DA &#40;24&#44;35 &#177; 12&#44;57 ng&#47;mL&#41; e grupo controle &#40;29&#44;83 &#177; 19&#44;52 ng&#47;mL&#41;&#46; Al&#233;m disso&#44; 17 pacientes com PV tinham n&#237;veis s&#233;ricos de IL&#8208;29 nitidamente elevados quando comparados com aqueles ap&#243;s o tratamento &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0005">fig&#46; 1</a>B&#59; p &#61; 0&#44;0007&#41;&#46; Al&#233;m disso&#44; como mostrado na <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0005">figura 1</a>C&#44; os n&#237;veis s&#233;ricos de IL&#8208;29 em pacientes com PV foram correlacionados com os escores PASI &#40;r &#61; 0&#44;3319&#44; p &#61; 0&#44;034&#41;&#46;</p><elsevierMultimedia ident="fig0005"></elsevierMultimedia></span><span id="sec0055" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0085">IL&#8208;29 regula positivamente a express&#227;o de mRNA de IL&#8208;6&#44; TNF&#8208;&#945; e IL&#8208;17 em CMSP de pacientes com PV</span><p id="par0060" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Para explorar o papel da IL&#8208;29 na patog&#234;nese da PV&#44; analisamos os efeitos da IL&#8208;29 na express&#227;o do mRNA de citocinas &#40;incluindo IL&#8208;6&#44; TNF&#8208;&#945;&#44; IL&#8208;17&#44; IL&#8208;4&#44; IFN&#8208;&#947; e IL&#8208; 10&#41; em CMSP de 10 pacientes com PV por PCR quantitativa em tempo real&#46; Como mostrado na <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0010">figura 2</a>A&#8208;C&#44; a IL&#8208;29 causou um aumento acentuado nos n&#237;veis de mRNA de IL&#8208;6&#44; TNF&#8208;&#945; e IL&#8208;17 em CMSP de pacientes com PV tratados com IL&#8208;29 quando comparados com controles tratados com PBS&#46; Entretanto&#44; a express&#227;o de mRNA de IL&#8208;4&#44; IL10 e IFN&#8208;&#947; n&#227;o apresentou altera&#231;&#245;es em CMSP de pacientes com PV ap&#243;s a incuba&#231;&#227;o com IL&#8208;29 &#40;dados n&#227;o mostrados&#41;&#46;</p><elsevierMultimedia ident="fig0010"></elsevierMultimedia></span><span id="sec0060" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0090">IL&#8208;29 aumenta a express&#227;o de IL&#8208;6 e IL&#8208;8 em c&#233;lulas HaCat</span><p id="par0065" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Para explorar a fun&#231;&#227;o da IL&#8208;29 na patog&#234;nese da PV&#44; tamb&#233;m testamos a express&#227;o de mRNA de citocinas &#40;IL&#8208;6 e IL&#8208;8&#41; em c&#233;lulas HaCat ap&#243;s tratamento com IL&#8208;29 recombinante por PCR quantitativa em tempo real&#46; Como mostrado nas figuras 2D e 2E&#44; a IL&#8208;29 causou um aumento n&#237;tido nos n&#237;veis de mRNA de IL&#8208;6 e IL&#8208;8 em c&#233;lulas HaCat tratadas com IL&#8208;29 quando comparadas com controles tratados com PBS&#46;</p></span></span><span id="sec0065" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0095">Discuss&#227;o</span><p id="par0070" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Como descrito&#44; a IL&#8208;29&#44; um novo membro da fam&#237;lia das citocinas IFN tipo III&#44; est&#225; intimamente relacionada com a patog&#234;nese de muitos tipos de doen&#231;as autoimunes e inflamat&#243;rias&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0135"><span class="elsevierStyleSup">5&#44;7&#44;13&#44;14</span></a> Neste estudo&#44; aumento dos n&#237;veis s&#233;ricos de IL&#8208;29 foi encontrado em pacientes com PV em compara&#231;&#227;o com aqueles em pacientes com DA e controles saud&#225;veis&#46; Al&#233;m disso&#44; os n&#237;veis s&#233;ricos de IL&#8208;29 foram correlacionados com a gravidade da PV&#46; Os dados sugerem que a IL&#8208;29 pode desempenhar um papel na patog&#234;nese da PV&#46;</p><p id="par0075" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Muitos pesquisadores relataram que a IL&#8208;29 pode ser expressa em muitos tipos de c&#233;lulas e apresentar atividades imunorregulat&#243;rias em CMSP virgens &#40;<span class="elsevierStyleItalic">na&#239;ve</span>&#41;&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0115"><span class="elsevierStyleSup">1&#44;15</span></a> Wang et al&#46; demonstraram que a IL&#8208;29 aumenta a produ&#231;&#227;o de citocinas pr&#243;&#8208;inflamat&#243;rias induzidas por receptor toll&#8208;like &#40;TLR&#41; em sinovi&#243;citos semelhantes a fibroblastos na artrite reumatoide &#40;FLSs&#8208;AR&#41; por meio da regula&#231;&#227;o positiva de TLR&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0190"><span class="elsevierStyleSup">16</span></a> Gallagher et al&#46; relataram que a IL&#8208;29 parece ser um inibidor das respostas Th2 humanas&#44; cuja a&#231;&#227;o &#233; principalmente direcionada &#224; IL&#8208;13&#44; mas que tamb&#233;m pode afetar as respostas Th2 em geral e n&#227;o evoca uma eleva&#231;&#227;o complementar da secre&#231;&#227;o de IFN&#8208;&#947;&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0160"><span class="elsevierStyleSup">10</span></a> Yan et al&#46; demonstraram que a IL&#8208;29 combinada com o fator estimulador de col&#244;nia de granul&#243;citos&#8208;macr&#243;fagos humanos recombinantes &#40;rhGM&#8208;CSF&#41; e IL&#8208;4 pode induzir a matura&#231;&#227;o das c&#233;lulas dendr&#237;ticas &#40;CD&#41;&#44; aumentar a express&#227;o das mol&#233;culas coestimulat&#243;rias e estimular a produ&#231;&#227;o de citocinas e quimiocinas na fase de toler&#226;ncia imunol&#243;gica e na fase de depura&#231;&#227;o imunol&#243;gica&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0195"><span class="elsevierStyleSup">17</span></a> Muitos estudos mostraram que as c&#233;lulas Th1&#47;Th17 desempenham pap&#233;is cruciais na patog&#234;nese da psor&#237;ase&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0200"><span class="elsevierStyleSup">18&#8211;20</span></a> Les&#245;es psori&#225;sicas podem secretar muitas citocinas inflamat&#243;rias&#44; como IFN&#8208;&#947;&#44; IL&#8208;6&#44; IL&#8208;1 &#946;&#44; IL&#8208;8&#44; IL&#8208;17 e TNF&#8208;&#945;&#44; que contribuem para o desenvolvimento da psor&#237;ase&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0215"><span class="elsevierStyleSup">21</span></a> Neste estudo&#44; foram investigados os efeitos da IL&#8208;29 na express&#227;o de mRNA de citocinas &#40;incluindo IL&#8208;6&#44; TNF&#8208;&#945;&#44; IL&#8208;17&#44; IL&#8208;4&#44; IFN&#8208;&#947; e IL&#8208;10&#41; em CMSP de pacientes com PV e c&#233;lulas HaCat tratadas com IL&#8208;29&#46; Foi demonstrado que a IL&#8208;29 aumentou significativamente a express&#227;o do mRNA de TNF&#8208;&#945;&#44; IL&#8208;6 e IL&#8208;17 em CMSP de pacientes com PV&#46; Tamb&#233;m foi demonstrado que a IL&#8208;29 obviamente aumentou a express&#227;o do mRNA da IL&#8208;6 e IL&#8208;8 em c&#233;lulas HaCat&#46; Um estudo anterior indicou que TNF&#8208;&#945;&#44; IL&#8208;6&#44; IL&#8208;8 e IL&#8208;17 desempenham papel crucial na patog&#234;nese da PV&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0200"><span class="elsevierStyleSup">18&#44;22</span></a> Portanto&#44; sugere&#8208;se que a IL&#8208;29 pode regular positivamente a express&#227;o de citocinas em CMSP e queratin&#243;citos e aumentar a rea&#231;&#227;o inflamat&#243;ria na patog&#234;nese da PV&#46;</p></span><span id="sec0070" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0100">Conclus&#227;o</span><p id="par0080" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Tomados em conjunto&#44; os dados deste estudo fornecem as primeiras observa&#231;&#245;es sobre a associa&#231;&#227;o de IL&#8208;29 e PV e demonstraram n&#237;veis s&#233;ricos elevados de IL&#8208;29 em pacientes com PV&#46; Sugere&#8208;se que a IL&#8208;29 pode atuar como uma citocina pr&#243;&#8208;inflamat&#243;ria e desempenhar um papel na patog&#234;nese da PV&#46;</p></span><span id="sec0075" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0105">Declara&#231;&#227;o de &#233;tica</span><p id="par0085" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A pesquisa em humanos foi aprovada pelo Comit&#234; de &#201;tica do Chengdu Second People&#39;s Hospital &#40;n&#176; 2015007&#41;&#46; Todos os pacientes eram asi&#225;ticos e assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido&#46;</p></span><span id="sec0080" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0110">Suporte financeiro</span><p id="par0090" class="elsevierStylePara elsevierViewall">O estudo recebeu&#44; em parte&#44; suporte financeiro da Natural Science Foundation of China &#40;81470143&#41; e do Provincial Department of Science and Technology de Sichuan &#40;19YYJC0557&#41;&#46;</p></span><span id="sec0085" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0115">Contribui&#231;&#227;o dos autores</span><p id="par0095" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Li&#8208;Xin Fu&#58; Concep&#231;&#227;o&#44; planejamento e defini&#231;&#227;o do conte&#250;do intelectual&#59; busca na literartura&#59; estudos experimentais&#59; prepara&#231;&#227;o do manuscrito&#59; edi&#231;&#227;o do manuscrito&#46;</p><p id="par0100" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Tao Chen&#58; Concep&#231;&#227;o&#44; planejamento e defini&#231;&#227;o do conte&#250;do intelectual&#59; prepara&#231;&#227;o do manuscrito&#59; edi&#231;&#227;o do manuscrito&#46;</p><p id="par0105" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Zai&#8208;Pei Guo&#58; Concep&#231;&#227;o&#44; planejamento e defini&#231;&#227;o do conte&#250;do intelectual&#59; revis&#227;o do manuscrito&#46;</p><p id="par0110" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Na Cao&#58; Obten&#231;&#227;o e an&#225;lise dos dados&#46;</p><p id="par0115" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Li&#8208;Wen Zhang&#58; Busca na literartura&#59; estudos experimentais</p><p id="par0120" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Pei&#8208;Mei Zhou&#58; Obten&#231;&#227;o e an&#225;lise dos dados&#46;</p></span><span id="sec0090" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0120">Conflito de interesses</span><p id="par0125" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Nenhum&#46;</p></span></span>"
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Páginas 416-421 (1 julho 2021)
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Níveis séricos aumentados de interferon lambda 1 / interleucina-29 em pacientes com psoríase vulgar
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Li‐xin Fua, Tao Chena, Zai‐Pei Guob,
Autor para correspondência
guozp930@163.com

Autor para correspondência.
, Na Caoa, Li‐Wen Zhanga, Pei‐Mei Zhoua
a Departamento de Dermatologia e Venereologia, Chengdu Second People's Hospital, Chengdu, Sichuan, China
b Departamento de Dermatologia e Venereologia, West China Hospital of Sichuan University, Chengdu, Sichuan, China
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Resumo
Fundamentos

Interferon lambda 1 (IFN‐λ1), também denominado interleucina 29 (IL‐29), é um novo membro da família IFN tipo III ou IFN‐λ. A IL‐29 desempenha um papel importante na patogênese de muitos tipos de doenças autoimunes e inflamatórias.

Objetivo

Estudar o papel da IL‐29 na patogênese da psoríase vulgar (PV).

Métodos

Detectamos os níveis séricos de IL‐29 em 41 pacientes com PV, 23 pacientes com dermatite atópica e 38 controles pareados por idade e gênero por ensaio imunoenzimático (ELISA) sanduíche. Os efeitos da IL‐29 na expressão de citocinas, como IL‐6, IL‐17, IL‐8, IL‐4, IL10, IFN‐γ e fator de necrose tumoral‐α (TNF‐α), em células mononucleares de sangue periférico (CMSP) e células HaCat foram determinadas por PCR quantitativo em tempo real.

Resultados

Nossos dados indicaram que os níveis séricos de IL‐29 estavam significativamente elevados em pacientes com PV quando comparados com pacientes com dermatite atópica e o grupo controle. Além disso, os níveis séricos de IL‐29 estavam intimamente associados à gravidade da PV. Ademais, a IL‐29 regulou positivamente os níveis de expressão de mRNA de IL‐6, IL‐17 e TNF‐α em CMSP de pacientes com PV, e aumentou a expressão de IL‐6 e IL‐8 nas células HaCat.

Conclusão

Este estudo fornece as primeiras observações sobre a associação de IL‐29 e PV e mostrou níveis séricos elevados de IL‐29. Sugere‐se que a IL‐29 pode desempenhar um papel na patogênese da PV.

Palavras‐chave:
Células mononucleares de sangue periférico
Interleucinas
Psoríase
Texto Completo
Introdução

A psoríase é um distúrbio cutâneo inflamatório crônico comum mediado por células T, histopatologicamente caracterizado por hiperproliferação de queratinócitos e infiltração vascular dérmica por células mononucleares.1–4 Entretanto, os mecanismos moleculares envolvidos no desenvolvimento dessa doença ainda não foram totalmente elucidados.

O interferon lambda 1 (IFN‐λ1), também chamado interleucina 29 (IL‐29), é um novo membro da família IFN tipo III ou IFN‐λ. A família IFN tipo III é composta por IFN‐λ1 (IL‐29), IFN‐λ2 (IL‐28A) e IFN‐λ3 (IL‐28B). Muitos investigadores demonstraram que a IL‐29 desempenha um papel importante na patogênese de muitos tipos de doenças autoimunes e inflamatórias, como esclerose sistêmica, artrite reumatoide e lúpus eritematoso sistêmico.5–7 Entretanto, a associação de IL‐29 com a psoríase vulgar (PV) ainda é pouco compreendida. Assim, neste estudo, comparamos os níveis séricos de IL‐29 em pacientes com PV, dermatite atópica e em controles saudáveis.

Mais recentemente, pesquisas indicaram que a IL‐29 pode afetar a produção de citocinas ao ativar o transdutor de sinal/Janus Kinase e ativadores da via de transcrição. A IL‐29 regulou positivamente a expressão de IL‐1β, IL‐8, MCP‐1 e promoveu a migração de monócitos/macrófagos na síndrome de Simpson‐Golabi‐Behmel em humanos.8 A IL‐29 pode aumentar a produção de IL‐10, IL‐8 e IL‐6 em macrófagos e inibir a liberação de IL‐13 em células T.9–11 Além disso, He et al. relataram que a IL‐29 poderia induzir a secreção de IL‐6 e TNF das células T CD14+, bem como IL‐4 e IL‐13 dos mastócitos.12 Os queratinócitos, sendo células importantes na imunidade inata, desempenham um papel importante na inflamação cutânea e na resposta imune por meio da expressão de citocinas e peptídeos antimicrobianos na psoríase. As células HaCat são um tipo de linhagem celular de queratinócitos. Para estudar o papel da IL‐29 na patogênese da PV, investigamos neste estudo os efeitos da IL‐29 na expressão do mRNA de citocinas (incluindo IL‐6, TNF‐α, IL‐17, IL‐8, IL‐4, IFN‐γ e IL‐10) em células mononucleares de sangue periférico (CMSP) de pacientes com PV e na linhagem celular de queratinócitos HaCaT.

MétodosPacientes

Quarenta e um pacientes com PV, 23 pacientes com dermatite atópica (DA) e 38 controles pareados por idade e gênero foram incluídos neste estudo. A história detalhada de cada paciente é fornecida na tabela 1. A gravidade da doença em pacientes com PV ou DA foi determinada pelo Índice de Área e Gravidade da Psoríase (PASI, Psoriasis Area and Severity Index) ou pelo escore da DA (SCORAD, Scoring Atopic Dermatitis). Entre eles, 17 pacientes com PV foram tratados com esteroide tópico e alcatrão e composto oral com glicirrizina (cada comprimido contém glicirrizina 25mg, glicirrizinato de monoamônio 35mg, glicina 25mg e DL‐metionina 25mg). Os pacientes foram tratados com uma dose de dois comprimidos por vez, três vezes/dia. Nippon Kayaku, Tóquio, Japão. As amostras de soro desses pacientes foram coletadas antes e depois do tratamento. Além disso, amostras de sangue heparinizado foram coletadas de 16 pacientes com PV. Não havia qualquer história de infecções virais recentes, linfocitose ou linfopenia, ou qualquer outra investigação correspondente nesses pacientes. Todos os pacientes com PV tinham rigorosamente PV somente, sem qualquer sobreposição de outros fenótipos.

Tabela 1.

Dados demográficos da coorte

  PV  DA  Controles 
Número de pacientes  41  23  38 
Sexo  21 M / 20 F  11 M / 12 F  20 M / 18 F 
Atividade da doença  15,71 (4,8‐36,4)a  34,87 (18,5‐67)b  NA 
a

A atividade da doença em pacientes com psoríase vulgar foi avaliada pelo Índice de Área e Gravidade da Psoríase (PASI, Psoriasis Area and Severity Index).

b

A atividade da doença em pacientes com dermatite atópica foi avaliada pelo escore no índice da dermatite atópica (SCORAD).

PV, psoríase vulgar; DA, dermatite atópica; NA, não aplicável.

Ensaio para níveis séricos de IL‐29

Os níveis séricos de IL‐29 em diferentes grupos de pacientes foram medidos por kits de ensaio imunoenzimático ELISA (Enzyme‐Linked Immunosorbent Assay) comercialmente disponíveis (Boster, Wuhan, China) seguindo as instruções do fabricante.

Cultura de células

As CMSP de pacientes com PV foram isoladas do sangue periférico coletado por centrifugação de gradiente de densidade utilizando kits comercialmente disponíveis (Tianjin Haoyang Biological Manufacture Co. Ltd., Tianjin, China). As CMSP isoladas de cada paciente foram divididas em dois grupos e cultivadas em DMEM contendo 10% de FBS, 100mg/mL de penicilina e estreptomicina em placa de seis poços com 1mL/poço. Um grupo de células foi tratado com 100 ng/mL de IL‐29 recombinante (Peprotech, Londres, RU) por 6 horas, e o outro grupo foi tratado com PBS como controle. Após o tratamento, o RNA total foi extraído com o reagente Trizol (Invitrogen Corp, Carlsbad, CA, EUA) de acordo com as instruções do fabricante.

As células HaCaT foram cultivadas em DMEM contendo 10% de FBS, 100mg/mL de penicilina e estreptomicina e tratadas com IL‐29 recombinante (1 ng/mL, 10 ng/mL, 100 ng/mL, 1000 ng/mL) ou TNF‐α (10 ng/mL) por 2 horas. As células foram tratadas com PBS como controle. Após o tratamento, o RNA total das células foi extraído com o reagente Trizol de acordo com as instruções do fabricante.

PCR quantitativa em tempo real

Os níveis de mRNA de IL‐6, TNF‐α, IL‐17, IL‐4, IFN‐γ, IL‐10 e GAPDH em CMSP após incubação com IL‐29 ou PBS e a expressão de IL‐6, IL‐8 e GAPDH em células HaCat após incubação com IL‐29, TNF‐α ou PBS foram determinados por PCR quantitativa em tempo real. O cDNA foi sintetizado a partir do RNA total utilizando o kit de reagentes RT com gDNA Eraser (Takara, Dalian, China). As amostras de cDNA foram amplificadas em um volume de reação de 20μL contendo 10μL de 2× SYBR Green Master Mix (Takara, Dalian, China), 2μL de cDNA e 0,25μM de primers qPCR. Foram utilizados os seguintes primers: IL‐4 (P216616, Bioneer, Inc., Daejeon, Coreia); IL‐6 (P211161, Bioneer, Inc., Daejeon, Coreia); IL‐10 (P285360, Bioneer, Inc., Daejeon, Coreia); IL‐17 (P291322, Bioneer, Inc., Daejeon, Coreia); IFN‐γ (Catálogo: HQP009467, GeneCopoeia, EUA); TNF‐α (P237423, Bioneer, Inc., Daejeon, Coreia); GAPDH (5’‐CGGAGTCAACGGATTTGGTC‐3’ e 5’‐CGGTGCCATGGAATTTGCCA‐3’). As condições foram 95°C por 5 minutos, e 95°C por 15 segundos e 60°C por 30 segundos de 40 ciclos com uma extensão final a 72°C por 5 minutos. Os níveis de mRNA de IL‐6, TNF‐α, IL‐17, IL‐4, IFN‐γ, IL‐10 e IL‐8 foram expressos como níveis relativos de mRNA em comparação com o controle e determinados pelo método 2‐ΔΔCt.

Análise estatística

Cada experimento foi realizado pelo menos três vezes. Os dados foram expressos como média ± DP. As diferenças estatísticas entre os grupos foram determinadas de acordo com a análise de variância unilateral, teste t de Student ou teste U de Mann‐Whitney. Os dados pareados foram comparados pelo teste signed‐rank de Wilcoxon. A associação da IL‐29 com os escores PASI foi analisada pelo teste de Spearman; p < 0,05 foi definido como estatisticamente significativo.

ResultadosNíveis séricos elevados de IL‐29 em pacientes com PV

Os níveis séricos de IL‐29 em pacientes com PV e DA e controles foram detectados por ELISA. Como mostrado na figura 1A, os níveis séricos de IL‐29 em pacientes com PV (41,62 ± 23,26 ng/mL) foram significativamente maiores do que aqueles em pacientes com DA (24,35 ± 12,57 ng/mL) e grupo controle (29,83 ± 19,52 ng/mL). Além disso, 17 pacientes com PV tinham níveis séricos de IL‐29 nitidamente elevados quando comparados com aqueles após o tratamento (fig. 1B; p = 0,0007). Além disso, como mostrado na figura 1C, os níveis séricos de IL‐29 em pacientes com PV foram correlacionados com os escores PASI (r = 0,3319, p = 0,034).

Figura 1.

Aumento dos níveis séricos de IL‐29 em pacientes com psoríase vulgar (PV). Os níveis séricos de IL‐29 em pacientes com PV e dermatite atópica (DA) e controles saudáveis foram determinados por ELISA. A, Os níveis séricos de IL‐29 em pacientes com PV em estágio agudo foram significativamente maiores do que em pacientes com DA e controles; os valores de p são baseados no teste U de Mann‐Whitney. B, O teste signed‐rank de Wilcoxon para dados pareados mostrou que os níveis séricos de IL‐29 de 17 pacientes com PV no estágio agudo foram significativamente maiores do que aqueles no estágio de convalescença. C, Uma correlação positiva foi demonstrada entre os níveis séricos de IL‐29 e os escores PASI em pacientes com PV pelos testes de Spearman.

(0.17MB).
IL‐29 regula positivamente a expressão de mRNA de IL‐6, TNF‐α e IL‐17 em CMSP de pacientes com PV

Para explorar o papel da IL‐29 na patogênese da PV, analisamos os efeitos da IL‐29 na expressão do mRNA de citocinas (incluindo IL‐6, TNF‐α, IL‐17, IL‐4, IFN‐γ e IL‐ 10) em CMSP de 10 pacientes com PV por PCR quantitativa em tempo real. Como mostrado na figura 2A‐C, a IL‐29 causou um aumento acentuado nos níveis de mRNA de IL‐6, TNF‐α e IL‐17 em CMSP de pacientes com PV tratados com IL‐29 quando comparados com controles tratados com PBS. Entretanto, a expressão de mRNA de IL‐4, IL10 e IFN‐γ não apresentou alterações em CMSP de pacientes com PV após a incubação com IL‐29 (dados não mostrados).

Figura 2.

A‐C, Expressão de mRNA de IL‐6, IL‐17 e TNF‐α induzida por IL‐29 em células mononucleares de sangue periférico (CMSP) de pacientes com psoríase vulgar (PV). As CMSP obtidas de 10 pacientes com PV foram tratadas com IL‐29 100 ng/mL ou PBS por 6 horas. Em seguida, a expressão de mRNA de IL‐6, IL‐17 e TNF‐α nas CMSP foi medida por PCR quantitativa em tempo real. O IL‐29 nitidamente aumentou a expressão de mRNA de IL‐6, IL‐17 e TNF‐α nas CMSP. Os valores de p são baseados no teste t. n = 10, *p < 0,05, **p < 0,01, em comparação com o grupo controle. D‐E, A IL‐29 aumentou a expressão de mRNA de IL‐6 e IL‐8 em células HaCat. As células HaCat foram tratadas com IL‐29 recombinante (1 ng/mL, 10 ng/mL, 100 ng/mL, 1000 ng/mL) ou TNF‐α (10 ng/mL) por 2 horas. Subsequentemente, a expressão de mRNA de IL‐6 e IL‐8 em células HaCat foi medida por PCR quantitativa em tempo real. A IL‐29 nitidamente aumentou o mRNA de IL‐6 e IL‐8 em células HaCat. Os valores de p são baseados na análise de variância unilateral. n = 10, *p < 0,05, **p < 0,01, em comparação com o grupo controle. Todos os dados são expressos como média ± DP.

(0.19MB).
IL‐29 aumenta a expressão de IL‐6 e IL‐8 em células HaCat

Para explorar a função da IL‐29 na patogênese da PV, também testamos a expressão de mRNA de citocinas (IL‐6 e IL‐8) em células HaCat após tratamento com IL‐29 recombinante por PCR quantitativa em tempo real. Como mostrado nas figuras 2D e 2E, a IL‐29 causou um aumento nítido nos níveis de mRNA de IL‐6 e IL‐8 em células HaCat tratadas com IL‐29 quando comparadas com controles tratados com PBS.

Discussão

Como descrito, a IL‐29, um novo membro da família das citocinas IFN tipo III, está intimamente relacionada com a patogênese de muitos tipos de doenças autoimunes e inflamatórias.5,7,13,14 Neste estudo, aumento dos níveis séricos de IL‐29 foi encontrado em pacientes com PV em comparação com aqueles em pacientes com DA e controles saudáveis. Além disso, os níveis séricos de IL‐29 foram correlacionados com a gravidade da PV. Os dados sugerem que a IL‐29 pode desempenhar um papel na patogênese da PV.

Muitos pesquisadores relataram que a IL‐29 pode ser expressa em muitos tipos de células e apresentar atividades imunorregulatórias em CMSP virgens (naïve).1,15 Wang et al. demonstraram que a IL‐29 aumenta a produção de citocinas pró‐inflamatórias induzidas por receptor toll‐like (TLR) em sinoviócitos semelhantes a fibroblastos na artrite reumatoide (FLSs‐AR) por meio da regulação positiva de TLR.16 Gallagher et al. relataram que a IL‐29 parece ser um inibidor das respostas Th2 humanas, cuja ação é principalmente direcionada à IL‐13, mas que também pode afetar as respostas Th2 em geral e não evoca uma elevação complementar da secreção de IFN‐γ.10 Yan et al. demonstraram que a IL‐29 combinada com o fator estimulador de colônia de granulócitos‐macrófagos humanos recombinantes (rhGM‐CSF) e IL‐4 pode induzir a maturação das células dendríticas (CD), aumentar a expressão das moléculas coestimulatórias e estimular a produção de citocinas e quimiocinas na fase de tolerância imunológica e na fase de depuração imunológica.17 Muitos estudos mostraram que as células Th1/Th17 desempenham papéis cruciais na patogênese da psoríase.18–20 Lesões psoriásicas podem secretar muitas citocinas inflamatórias, como IFN‐γ, IL‐6, IL‐1 β, IL‐8, IL‐17 e TNF‐α, que contribuem para o desenvolvimento da psoríase.21 Neste estudo, foram investigados os efeitos da IL‐29 na expressão de mRNA de citocinas (incluindo IL‐6, TNF‐α, IL‐17, IL‐4, IFN‐γ e IL‐10) em CMSP de pacientes com PV e células HaCat tratadas com IL‐29. Foi demonstrado que a IL‐29 aumentou significativamente a expressão do mRNA de TNF‐α, IL‐6 e IL‐17 em CMSP de pacientes com PV. Também foi demonstrado que a IL‐29 obviamente aumentou a expressão do mRNA da IL‐6 e IL‐8 em células HaCat. Um estudo anterior indicou que TNF‐α, IL‐6, IL‐8 e IL‐17 desempenham papel crucial na patogênese da PV.18,22 Portanto, sugere‐se que a IL‐29 pode regular positivamente a expressão de citocinas em CMSP e queratinócitos e aumentar a reação inflamatória na patogênese da PV.

Conclusão

Tomados em conjunto, os dados deste estudo fornecem as primeiras observações sobre a associação de IL‐29 e PV e demonstraram níveis séricos elevados de IL‐29 em pacientes com PV. Sugere‐se que a IL‐29 pode atuar como uma citocina pró‐inflamatória e desempenhar um papel na patogênese da PV.

Declaração de ética

A pesquisa em humanos foi aprovada pelo Comitê de Ética do Chengdu Second People's Hospital (n° 2015007). Todos os pacientes eram asiáticos e assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido.

Suporte financeiro

O estudo recebeu, em parte, suporte financeiro da Natural Science Foundation of China (81470143) e do Provincial Department of Science and Technology de Sichuan (19YYJC0557).

Contribuição dos autores

Li‐Xin Fu: Concepção, planejamento e definição do conteúdo intelectual; busca na literartura; estudos experimentais; preparação do manuscrito; edição do manuscrito.

Tao Chen: Concepção, planejamento e definição do conteúdo intelectual; preparação do manuscrito; edição do manuscrito.

Zai‐Pei Guo: Concepção, planejamento e definição do conteúdo intelectual; revisão do manuscrito.

Na Cao: Obtenção e análise dos dados.

Li‐Wen Zhang: Busca na literartura; estudos experimentais

Pei‐Mei Zhou: Obtenção e análise dos dados.

Conflito de interesses

Nenhum.

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Como citar este artigo: Fu LX, Chen T, Guo ZP, Cao N, Zhang LW, Zhou PM. Enhanced serum interferon‐lambda 1 interferon-lambda 1/interleukin-29 levels in patients with psoriasis vulgaris. An Bras Dermatol. 2021;96:416–21.

Trabalho realizado no Departamento de Dermatologia e Venereologia, Chengdu Second People's Hospital and Open Laboratory, West China Institute of Woman and Children's Health, West China Second University Hospital, Sichuan University, Chengdu, Sichuan, China.

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