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como o desenvolvimento folicular e sua matura&#231;&#227;o ocorrem&#46; O desenvolvimento folicular e sua posterior diferencia&#231;&#227;o envolvem uma complexa s&#233;rie de eventos nos quais fatores de crescimento geram o remodelamento da matriz celular e de mol&#233;culas como proteoglicanos&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0120"><span class="elsevierStyleSup">3&#8211;6</span></a></p><p id="par0020" class="elsevierStylePara elsevierViewall">As citoqueratinas &#40;CKs&#41; s&#227;o as principais prote&#237;nas que estruturam as c&#233;lulas epiteliais&#44; fornecem forma&#44; resist&#234;ncia e manuten&#231;&#227;o dos contatos intercelulares&#59; no fol&#237;culo piloso al&#233;m da fun&#231;&#227;o estrutural&#44; s&#227;o marcadores de matura&#231;&#227;o folicular e de citodiferencia&#231;&#227;o&#46; S&#227;o divididas em duas fam&#237;lias&#44; as do Tipo&#160;1&#44; as queratinas &#225;cidas&#44; e as do Tipo&#160;2&#44; as queratinas b&#225;sicas&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0140"><span class="elsevierStyleSup">7</span></a> No total&#44; 26 queratinas s&#227;o consideradas espec&#237;ficas do fol&#237;culo piloso&#44; compar&#225;vel &#224;s 29 expressas no epit&#233;lio&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0145"><span class="elsevierStyleSup">8</span></a></p><p id="par0025" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Uma gama de muta&#231;&#245;es nas CKs est&#225; relacionada a doen&#231;as que afetam a estrutura e a densidade dos cabelos em humanos e animais&#46; Doen&#231;as como hipotricoses e o moniletrix j&#225; foram relacionadas a muta&#231;&#245;es espec&#237;ficas de algumas CKs&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0150"><span class="elsevierStyleSup">9&#8211;11</span></a> Outras doen&#231;as que podem afetar o fol&#237;culo piloso&#44; como o l&#237;quen plano pilar&#44; mostram um padr&#227;o alterado na express&#227;o de determinadas CKs que poderiam ser usadas como marcadoras precoces para essa doen&#231;a&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0165"><span class="elsevierStyleSup">12&#44;13</span></a> Assim&#44; as CKs podem ser alvo para desenvolvimento de f&#225;rmacos e m&#233;todos diagn&#243;sticos que possam auxiliar no diagn&#243;stico precoce e tratamento de doen&#231;as do fol&#237;culo piloso&#46;</p><p id="par0030" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Embora j&#225; exista uma literatura vasta sobre os fol&#237;culos pilosos e sobre as CK&#44; pouco &#233; conhecido sob a express&#227;o das CK durante a diferencia&#231;&#227;o dos fol&#237;culos pilosos humanos&#46; Devido &#224; import&#226;ncia das CK no desenvolvimento dos fol&#237;culos pilosos e a escassez de informa&#231;&#245;es sobre esse assunto&#44; estudamos o padr&#227;o de express&#227;o das CK no fol&#237;culo piloso humano em desenvolvimento&#46;</p></span><span id="sec0010" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0045">M&#233;todos</span><p id="par0035" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Um estudo retrospectivo que envolveu cortes histol&#243;gicos provenientes de &#225;reas pilosas de fragmentos de pele de embri&#245;es&#47;fetos humanos em diferentes est&#225;gios gestacionais &#40;4&#8211;2&#160;semanas&#41; foi obtido atrav&#233;s dos arquivos do Laborat&#243;rio de Dermatopatologia&#44; Departamento de Dermatologia&#44; Universidade de S&#227;o Paulo&#46; O estudo foi submetido &#224; Comiss&#227;o de &#201;tica desta institui&#231;&#227;o&#46; Parecer n&#176;&#160;CEP&#58;&#160;0172&#47;08&#46; As regi&#245;es analisadas e padronizadas foram&#58; couro cabeludo&#44; face&#44; superc&#237;lio&#44; membro superior&#44; dorso e genitais&#46; As morfologias das estruturas foram avaliadas previamente em Hematoxilina e eosina para melhor caracteriza&#231;&#227;o das estruturas&#46; Nesses cortes foi feito estudo imuno&#8208;histoqu&#237;mico com os seguintes marcadores&#58; CK1&#44; CK10&#44; CK13&#44; CK14&#44; CK16 e CK20&#46;</p><span id="sec0015" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0050">Protocolo imuno&#8208;histoqu&#237;mico</span><p id="par0040" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os cortes de&#160;3&#160;&#956;m foram desparafinizados e diafanizados em dois banhos de xilol&#46; A seguir os cortes foram reidratados em cadeia descendente de etanol e imersos em solu&#231;&#227;o de hidr&#243;xido de am&#244;nia a&#160;10&#37;&#46; Recupera&#231;&#227;o dos s&#237;tios antig&#234;nicos ocorreu de v&#225;rias formas&#44; dependeu do anticorpo prim&#225;rio usado &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabela 1</a>&#41;&#46;</p><elsevierMultimedia ident="tbl0005"></elsevierMultimedia><p id="par0045" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Ap&#243;s a lavagem&#44; o material foi incubado em solu&#231;&#227;o de per&#243;xido de hidrog&#234;nio 20&#160;volumes&#44; em seguida os cortes foram imersos duas vezes em solu&#231;&#227;o de TRIS Ph&#160;7&#44;4 e posteriormente&#44; foram incubados com solu&#231;&#227;o de&#160;0&#44;5&#37;&#160;BSA &#40;Sigma&#41;&#44; 2&#44;5&#37;&#160;SFB &#40;Cultilab&#41; em TRIS e incubados com o soro prim&#225;rio dilu&#237;do em solu&#231;&#227;o de&#160;1&#37; BSA &#40;Sigma&#41; em TRIS&#46; Os procedimentos posteriores foram sempre precedidos de lavagens no tamp&#227;o TRIS&#46; Ap&#243;s a incuba&#231;&#227;o com o anticorpo prim&#225;rio&#44; os esp&#233;cimes foram incubados com o reagente En Vision &#40;Dako&#41;&#46; Para a revela&#231;&#227;o&#44; os esp&#233;cimes foram incubados na solu&#231;&#227;o com agente DAB &#40;Sigma&#41;&#46; Os cortes histol&#243;gicos foram ent&#227;o contracorados com Hematoxilina de Carazzi e posteriormente desidratados em cadeia ascendente de &#225;lcoois&#44; diafanizados em tr&#234;s banhos de xilol e montados em resina Permount&#174; para o exame microsc&#243;pico&#46; Controles negativos foram feitos atrav&#233;s da incuba&#231;&#227;o de esp&#233;cimes com soro n&#227;o imune&#46; Todas as rea&#231;&#245;es de imuno&#8208;histoqu&#237;mica foram feitas paralelamente com tecidos adultos como controles negativo&#47;positivo&#46;</p><p id="par0050" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os resultados obtidos nas rea&#231;&#245;es imuno&#8208;histoqu&#237;micas foram analisados por dois observadores e tabulados de forma qualitativa&#46; Foram considerados positivos &#40;&#43;&#41; os esp&#233;cimes que apresentaram imunomarca&#231;&#227;o e negativos &#40;&#8208;&#41; os esp&#233;cimes que n&#227;o apresentaram imunoexpress&#227;o&#46;</p><p id="par0055" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Todos os resultados foram registrados pelo sistema de fotomicrografia digital Axio Vision &#40;Zeiss e Axiophot&#41;&#46;</p></span></span><span id="sec0020" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0055">Resultados</span><p id="par0060" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Foram avaliados&#160;73&#160;esp&#233;cimes provenientes de &#225;reas pilosas de embri&#245;es ou fetos que variaram de&#160;4&#8208;25&#160;semanas de idade gestacional&#46; Foram avaliados os seguintes marcadores&#58; CK1&#44; CK10&#44; CK13&#44; CK14&#44; CK16&#44; CK20&#44; nas regi&#245;es como&#58; couro cabeludo&#44; face&#44; superc&#237;lio&#44; membro superior&#44; dorso e genitais e os resultados podem ser avaliados na <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0010">tabela 2</a> e <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0005">figura 1</a>&#46; Analisamos todos os casos obtidos nos arquivos do Laborat&#243;rio de Dermatopatologia referente a &#225;reas pilosas de cada marcador&#46; Foram obtidos 12&#160;esp&#233;cimes para CK1&#59; 14&#160;esp&#233;cimes para CK14&#59; 9&#160;esp&#233;cimes para CK10&#59; 10&#160;esp&#233;cimes para CK13&#59; 21&#160;esp&#233;cimes para CK16 e apenas 7&#160;esp&#233;cimes para CK20&#46;</p><elsevierMultimedia ident="tbl0010"></elsevierMultimedia><elsevierMultimedia ident="fig0005"></elsevierMultimedia><span id="sec0025" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0060">CK1&#44; CK14&#44; CK10 e CK13</span><p id="par0065" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A imunomarca&#231;&#227;o para CK1&#44; CK10&#44; CK13 foi notada a partir da&#160;12&#170;&#160;semana gesta&#231;&#227;o nos fol&#237;culos pilosos primitivos e at&#233; a&#160;25&#170;&#160;semana gestacional nos fol&#237;culos mais plenamente desenvolvidos&#59; 25&#37;&#44; 55&#37;&#44; 70&#37; das l&#226;minas marcaram positivamente para a CK1&#44; CK10 e CK13 respectivamente&#44; na BRE&#44; no territ&#243;rio do &#243;stio folicular&#44; infund&#237;bulo&#44; gl&#226;ndula seb&#225;cea e papila d&#233;rmica&#46; As principais regi&#245;es marcadas foram a p&#225;lpebra&#44; face e genital&#46; A imunomarca&#231;&#227;o para CK14 foi vista em fol&#237;culos primitivos de embri&#245;es de&#160;9&#160;semanas de gesta&#231;&#227;o na regi&#227;o do membro superior e dorso e at&#233; em fol&#237;culos mais desenvolvidos com&#160;21&#160;semanas gestacionais&#59; 100&#37; dos casos marcaram positivamente para a CK14&#44; na BRE&#46; Todas as regi&#245;es analisadas foram marcadas&#46;</p></span><span id="sec0030" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0065">CK16 e CK20</span><p id="par0070" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A imunomarca&#231;&#227;o para CK16 foi vista em fol&#237;culos primitivos de embri&#245;es de&#160;12&#160;semanas de gesta&#231;&#227;o na regi&#227;o da face at&#233; em fol&#237;culos mais desenvolvidos com&#160;23&#160;semanas gestacionais&#59; 61&#37; das l&#226;minas marcaram positivamente para a CK16&#44; na BRE&#46; Todas as regi&#245;es analisadas foram marcadas&#46; A imunomarca&#231;&#227;o para CK20 foi vista em fol&#237;culos primitivos de embri&#245;es de&#160;14&#160;semanas de gesta&#231;&#227;o na regi&#227;o do couro cabeludo at&#233; fol&#237;culos mais desenvolvidos com&#160;25&#160;semanas gestacionais&#59; 57&#37; fetos marcaram para CK20&#44; no territ&#243;rio da BRE e papila d&#233;rmica&#46; Todas as regi&#245;es analisadas foram marcadas&#46;</p></span></span><span id="sec0035" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0070">Discuss&#227;o</span><p id="par0075" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Este estudo avaliou o padr&#227;o de express&#227;o das CK no fol&#237;culo piloso humano em desenvolvimento&#46; Existem poucos trabalhos na literatura sobre esse tema&#46;</p><p id="par0080" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Schirren et al&#46; foram os pioneiros em mostrar que as c&#233;lulas foliculares germinativas do placoide folicular fetal humano expressavam CK5&#44; CK6&#44; CK14&#44; CK17 e CK19 e que posteriormente&#44; com desenvolvimento folicular&#44; o padr&#227;o de express&#227;o nas CKs de cada por&#231;&#227;o do fol&#237;culo piloso se alterava&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0175"><span class="elsevierStyleSup">14</span></a></p><p id="par0170" class="elsevierStylePara elsevierViewall">De acordo com os dados obtidos verificou&#8208;se que entre nove&#160;e&#160;14 semanas gestacionais&#44; CK1&#44; CK14&#44; CK10&#44; CK13&#44; CK16 e CK20 tornaram&#8208;se expressas&#46; Apenas dois dos nossos marcadores foram avaliados por Schirren et al&#46;&#44; a CK14 e CK10&#46; Essas CKs foram encontradas nos fol&#237;culos pilosos em desenvolvimento&#44; a CK14 nas fases mais iniciais ainda na fase de placoide e tamb&#233;m posteriormente&#46; J&#225; a CK10 num fol&#237;culo piloso um pouco mais diferenciado&#44; na regi&#227;o do istmo na BRE&#44; nas c&#233;lulas suprabasais do infundibulum junto com CK14&#46; Os resultados desse trabalho foram semelhantes aos nossos&#44; a imunomarca&#231;&#227;o manteve o padr&#227;o cr&#226;nio caudal de distribui&#231;&#227;o&#46;</p><p id="par0090" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Segundo os dados obtidos&#44; a CK14 foi a primeira a ser expressa em embri&#245;es com menos de&#160;12&#160;semanas de vida&#44; em torno da 9&#170;&#160;semana gestacional&#46; Inicialmente&#44; tanto a CK1 e quanto a CK14 foram expressas na regi&#227;o no istmo&#46; Estudos que envolveram as CK1 e Ck14 mostraram que a express&#227;o de CK1 ocorre em todas as camadas epid&#233;rmicas&#44; enquanto que a express&#227;o de CK14 predominava na regi&#227;o epid&#233;rmica perifolicular&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180"><span class="elsevierStyleSup">15</span></a></p><p id="par0095" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Observa&#8208;se tambem que a CK1&#44; CK10&#44; CK13 e CK16 foram expressas com&#160;12&#160;semanas de idade gestacional&#46; Estudos que envolveram as Ck1 e Ck14 atrav&#233;s da via de sinaliza&#231;&#227;o Shh mostraram achados conflitantes&#46; Na superexpress&#227;o da CK1&#44; os camundongos no per&#237;odo embrion&#225;rio foram incapazes de desenvolver fol&#237;culos pilosos&#46; No outro modelo experimental&#44; na superexpress&#227;o da CK14&#44; ocorreu uma hiperprolifera&#231;&#227;o folicular&#44; al&#233;m de m&#250;ltiplas les&#245;es tipo carcinoma basocelular nos animais analisados&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">16&#44;17</span></a></p><p id="par0100" class="elsevierStylePara elsevierViewall">&#201; descrito na literatura que a hiperprolifera&#231;&#227;o das camadas epiteliais ocasionada por uma superexpress&#227;o de CK1 durante o desenvolvimento embrion&#225;rio altera a capacidade das c&#233;lulas basais de iniciar um programa de diferencia&#231;&#227;o celular adequado para forma&#231;&#227;o dos fol&#237;culos pilosos&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">16</span></a> Assim&#44; as CK1 e CK14 t&#234;m um papel importante na forma&#231;&#227;o do fol&#237;culo piloso fetal atrav&#233;s da cascata de sinaliza&#231;&#227;o Shh&#46; O exato tempo&#44; localiza&#231;&#227;o e concentra&#231;&#227;o da express&#227;o dessas CKs nessa via de sinaliza&#231;&#227;o Shh afetam o fen&#243;tipo dos fol&#237;culos pilosos no per&#237;odo fetal embrion&#225;rio&#44; mas sem altera&#231;&#245;es nos fol&#237;culos pilosos p&#243;s&#8208;natais&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">16</span></a></p><p id="par0105" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A CK10 &#233; uma CK epitelial classicamente relacionada &#224; hiperceratose epidermol&#237;tica&#44; seu moisacismo e muta&#231;&#245;es eventuais podem estar relacionadas a essa doen&#231;a ou doen&#231;as que a mimetizam&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0195"><span class="elsevierStyleSup">18</span></a> Em nosso trabalho a CK10 imunomarcou os fol&#237;culos pilosos na BRE&#44; assim como CK1 e CK14&#46;</p><p id="par0110" class="elsevierStylePara elsevierViewall">No presente estudo&#44; a CK16 foi expressa em regi&#245;es mais proliferativas do fol&#237;culo piloso&#44; principalmente na regi&#227;o do bulbo&#46; A CK16&#44; assim como as CK6 e CK17&#44; &#233; uma CK proliferativa e de repara&#231;&#227;o&#44; &#233; expressa em estados patol&#243;gicos e ao redor de tecidos em cicatriza&#231;&#227;o&#46; Corroborando os nossos achados&#44; &#233; descrito que essas CKs hiperproliferativas s&#227;o expressas nos fol&#237;culos pilosos em desenvolvimento&#44; quando j&#225; existe uma diferencia&#231;&#227;o epitelial&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0175"><span class="elsevierStyleSup">14</span></a></p><p id="par0115" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A CK13 &#233; uma CK epitelial j&#225; usada como imunomarcadora de neoplasia intraepitelial oral&#46; Mais recentemente foi avaliada sua express&#227;o junto com a CK17&#44; como imunomarcador para neoplasia intraepitelial vulvar&#46; No fol&#237;culo piloso em desenvolvimento foi observada em nosso trabalho imunomarcando a BRE dos fol&#237;culos pilosos fetais em desenvolvimento&#44; assim como as outras CK epiteliais&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0205"><span class="elsevierStyleSup">19</span></a></p><p id="par0120" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A CK20 &#233; um marcador para as c&#233;lulas de Merkel&#46; Assim como na literatura&#44; a sua imunoexpress&#227;o foi detectada em fol&#237;culos pilosos em um est&#225;gio mais avan&#231;ado de desenvolvimento&#44; a partir da 14&#170;&#160;semana de idade gestacional&#46; A literatura relata presen&#231;a de c&#233;lulas de Merkel na BRE de fol&#237;culos pilosos de vibrissas de roedores&#46; Em humanos&#44; nos fol&#237;culos pilosos fetais primitivos&#44; a CK20 foi marcada na camada basal do infund&#237;bulo&#44; mas n&#227;o em &#225;reas profundas dos fol&#237;culos pilosos&#44; inclusive o bulbo e a derme&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0210"><span class="elsevierStyleSup">20</span></a> No nosso trabalho&#44; conforme a literatura&#44; encontramos express&#227;o para CK20 nos fol&#237;culos pilosos j&#225; desenvolvidos em torno da 25&#170;&#160;semana gestacional na regi&#227;o da papila d&#233;rmica e na BRE&#44; por&#233;m tamb&#233;m em fol&#237;culos em per&#237;odo intermedi&#225;rio de desenvolvimento com&#160;14&#160;semanas gestacionais&#46;</p></span><span id="sec0040" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0075">Conclus&#227;o</span><p id="par0125" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A morfog&#234;nese do fol&#237;culo piloso &#233; uma reestrutura&#231;&#227;o do tecido epitelial e do tecido mesenquimal para formar uma unidade pilosseb&#225;cea completamente diferenciada&#46; N&#243;s observamos que os padr&#245;es de express&#227;o das CKs durante o desenvolvimento dos fol&#237;culos pilosos s&#227;o din&#226;micos como visto por outros autores na epiderme&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180"><span class="elsevierStyleSup">15</span></a> As CKs iniciam sua express&#227;o nos fol&#237;culos pilosos humanos em torno da&#160;9&#170;&#160;semana de idade gestacional&#44; a CK14 &#233; a primeira a ser identificada e com a maior percentual de marca&#231;&#227;o&#46; Nossos dados confirmam a literatura que mostra que as CKs s&#227;o marcadores de matura&#231;&#227;o do desenvolvimento dos fol&#237;culos pilosos e s&#227;o expressas a partir da fase de placoide folicular&#46; Inicialmente a express&#227;o dessas CKs coincide com as CKs expressas no epit&#233;lio primitivo&#58; CK1&#44; CK14&#44; CK10&#44; CK13 e a CK proliferativa&#58; CK16&#46; Como previamente relatado na literatura&#44; a CK20 foi expressa em fol&#237;culos pilosos mais desenvolvidos a partir da 14&#170;&#160;semana gestacional&#46; Os resultados quando colocados em conjunto indicam que desde as fases mais precoces do desenvolvimento folicular os fol&#237;culos pilosos progressivamente e coordenadamente se preparam para proteger a pele do feto para o parto e est&#237;mulo ambiental&#46; As compreens&#245;es dessas etapas de matura&#231;&#227;o s&#227;o importantes para o entendimento da estrutura dos fol&#237;culos pilosos normais e sua fun&#231;&#227;o no adulto na sa&#250;de e na doen&#231;a&#46; Nosso trabalho serviu para preencher uma lacuna na literatura sobre um tema pouco estudado&#46; N&#243;s tamb&#233;m acreditamos que se identificarmos os padr&#245;es de diferencia&#231;&#227;o das CKs nos fol&#237;culos pilosos em humanos podemos gerar questionamentos e incitar investiga&#231;&#245;es&#44; al&#233;m de abrir possibilidade para terapias regenerativas&#44; identifica&#231;&#227;o de biomarcadores precoces e potenciais alvos diagn&#243;sticos para as doen&#231;as do fol&#237;culo piloso&#46; Entretanto&#44; s&#227;o necess&#225;rios outros estudos investigativos para avaliar melhor o desenvolvimento e express&#227;o proteica dos fol&#237;culos pilosos humanos e colaborar no diagn&#243;stico e tratamento das doen&#231;as relacionadas a essa estrutura&#46;</p></span><span id="sec0045" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0080">Suporte financeiro</span><p id="par0130" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Fundo de Apoio &#224; Dermatologia &#40;Funaderm&#41;&#44; da Sociedade Brasileira de Dermatologia&#46; Coordena&#231;&#227;o de Aperfei&#231;oamento de Pessoal de N&#237;vel Superior &#40;Capes&#41;&#46;</p></span><span id="sec0050" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0085">Contribui&#231;&#227;o dos autores</span><p id="par0135" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Laura Maria Andrade Silva&#58; An&#225;lise estat&#237;stica&#59; aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; elabora&#231;&#227;o e reda&#231;&#227;o do manuscrito&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o dos dados&#59; participa&#231;&#227;o efetiva na orienta&#231;&#227;o da pesquisa&#59; participa&#231;&#227;o intelectual em conduta proped&#234;utica e&#47;ou terap&#234;utica de casos estudados&#59; revis&#227;o cr&#237;tica da literatura&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#46;</p><p id="par0140" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Ricardo HSIEH&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; concep&#231;&#227;o e planejamento do estudo&#59; participa&#231;&#227;o efetiva na orienta&#231;&#227;o da pesquisa&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#46;</p><p id="par0145" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Silvia Vanessa Lourenco&#58; Concep&#231;&#227;o e planejamento do estudo&#59; participa&#231;&#227;o efetiva na orienta&#231;&#227;o da pesquisa&#59; participa&#231;&#227;o intelectual em conduta proped&#234;utica e&#47;ou terap&#234;utica de casos estudados&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#46;</p><p id="par0150" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Neusa Yuriko Sakai Valente&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; concep&#231;&#227;o e planejamento do estudo&#59; participa&#231;&#227;o efetiva na orienta&#231;&#227;o da pesquisa&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#46;</p><p id="par0155" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Geise Rezende Paiva&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o dos dados&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#46;</p><p id="par0160" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Juliana Dumet Fernandes&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; concep&#231;&#227;o e planejamento do estudo&#59; elabora&#231;&#227;o e reda&#231;&#227;o do manuscrito&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o dos dados&#59; participa&#231;&#227;o intelectual em conduta proped&#234;utica e&#47;ou terap&#234;utica de casos estudados&#59; revis&#227;o cr&#237;tica da literatura&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#46;</p></span><span id="sec0055" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0090">Conflitos de interesse</span><p id="par0165" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Nenhum&#46;</p></span></span>"
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Anticorpo prim&#225;rio&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Clone&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Empresa&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Recupera&#231;&#227;o antig&#234;nica&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Dilui&#231;&#227;o&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Incuba&#231;&#227;o&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">&#8220;Overnight&#8221;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="\n
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                  \t\t\t\t">Citoqueratina 14&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">AB&#8208;1&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">Neomakers&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">Micro&#8208;ondas&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">1&#58;40&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">&#8220;Overnight&#8221;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="\n
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                  \t\t\t\t">Citoqueratina 16&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">DE&#8208;K10&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">Dako&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">Micro&#8208;ondas&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">1&#58;50&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">&#8220;Overnight&#8221;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">Citoqueratina 10&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">Dako&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t\ttop\n
                  \t\t\t\t">Micro&#8208;ondas&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">1&#58;50&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">&#8220;Overnight&#8221;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="\n
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                  \t\t\t\t">Citoqueratina 13&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">M 7003&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">Dako&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">Micro&#8208;ondas&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">&#8220;Overnight&#8221;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="\n
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                  \t\t\t\t">Citoqueratina 20&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">Clone Ks20&#46;8&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">Dako&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">Micro&#8208;ondas&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">1&#58;50&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">&#8220;Overnight&#8221;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr></tbody></table>
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Marcador&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Percentual de marca&#231;&#227;o&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Idade gestacional inicial de marca&#231;&#227;o&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th></tr></thead><tbody title="tbody"><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="\n
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                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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Investigação
Estudo imuno‐histoquímico de citoqueratinas no folículo piloso humano em desenvolvimento
Laura Maria Andrade Silvaa,b,c,d,
Autor para correspondência
contato@dralauraandrade.com

Autor para correspondência.
, Ricardo Hsiehe,f, Silvia Vanessa Lourençoe,g, Neusa Yuriko Sakai Valenteh, Geise Rezende Paivai, Juliana Dumet Fernandesa,d
a Programa de Pós‐Graduação em Medicina e Saúde, Faculdade de Medicina da Bahia, Universidade Federal da Bahia, Salvador, BA, Brasil
b Serviço de Dermatologia, Escola Bahiana de Medicina e Saúde Pública, Salvador, BA, Brasil
c Serviço de Dermatologia, Hospital Santa IzabelSalvador, BA, Brasil
d Departamento de Dermatologia, Faculdade de Medicina, Universidade Federal da Bahia, Salvador, BA, Brasil
e Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, Universidade de São Paulo, São Paulo, SP, Brasil
f Departamento de Patologia, Universidade Federal de Alfenas, Alfenas, MG, Brasil
g Faculdade de Odontologia, Universidade de São Paulo, São Paulo, SP, Brasil
h Departamento de Dermatologia, Faculdade de Medicina, Universidade de São Paulo, São Paulo, SP, Brasil
i Setor de Patologia, Hospital Santa Izabel, Escola Bahiana de Medicina e Saúde Pública, Salvador, BA, Brasil
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como o desenvolvimento folicular e sua matura&#231;&#227;o ocorrem&#46; O desenvolvimento folicular e sua posterior diferencia&#231;&#227;o envolvem uma complexa s&#233;rie de eventos nos quais fatores de crescimento geram o remodelamento da matriz celular e de mol&#233;culas como proteoglicanos&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0120"><span class="elsevierStyleSup">3&#8211;6</span></a></p><p id="par0020" class="elsevierStylePara elsevierViewall">As citoqueratinas &#40;CKs&#41; s&#227;o as principais prote&#237;nas que estruturam as c&#233;lulas epiteliais&#44; fornecem forma&#44; resist&#234;ncia e manuten&#231;&#227;o dos contatos intercelulares&#59; no fol&#237;culo piloso al&#233;m da fun&#231;&#227;o estrutural&#44; s&#227;o marcadores de matura&#231;&#227;o folicular e de citodiferencia&#231;&#227;o&#46; S&#227;o divididas em duas fam&#237;lias&#44; as do Tipo&#160;1&#44; as queratinas &#225;cidas&#44; e as do Tipo&#160;2&#44; as queratinas b&#225;sicas&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0140"><span class="elsevierStyleSup">7</span></a> No total&#44; 26 queratinas s&#227;o consideradas espec&#237;ficas do fol&#237;culo piloso&#44; compar&#225;vel &#224;s 29 expressas no epit&#233;lio&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0145"><span class="elsevierStyleSup">8</span></a></p><p id="par0025" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Uma gama de muta&#231;&#245;es nas CKs est&#225; relacionada a doen&#231;as que afetam a estrutura e a densidade dos cabelos em humanos e animais&#46; Doen&#231;as como hipotricoses e o moniletrix j&#225; foram relacionadas a muta&#231;&#245;es espec&#237;ficas de algumas CKs&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0150"><span class="elsevierStyleSup">9&#8211;11</span></a> Outras doen&#231;as que podem afetar o fol&#237;culo piloso&#44; como o l&#237;quen plano pilar&#44; mostram um padr&#227;o alterado na express&#227;o de determinadas CKs que poderiam ser usadas como marcadoras precoces para essa doen&#231;a&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0165"><span class="elsevierStyleSup">12&#44;13</span></a> Assim&#44; as CKs podem ser alvo para desenvolvimento de f&#225;rmacos e m&#233;todos diagn&#243;sticos que possam auxiliar no diagn&#243;stico precoce e tratamento de doen&#231;as do fol&#237;culo piloso&#46;</p><p id="par0030" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Embora j&#225; exista uma literatura vasta sobre os fol&#237;culos pilosos e sobre as CK&#44; pouco &#233; conhecido sob a express&#227;o das CK durante a diferencia&#231;&#227;o dos fol&#237;culos pilosos humanos&#46; Devido &#224; import&#226;ncia das CK no desenvolvimento dos fol&#237;culos pilosos e a escassez de informa&#231;&#245;es sobre esse assunto&#44; estudamos o padr&#227;o de express&#227;o das CK no fol&#237;culo piloso humano em desenvolvimento&#46;</p></span><span id="sec0010" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0045">M&#233;todos</span><p id="par0035" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Um estudo retrospectivo que envolveu cortes histol&#243;gicos provenientes de &#225;reas pilosas de fragmentos de pele de embri&#245;es&#47;fetos humanos em diferentes est&#225;gios gestacionais &#40;4&#8211;2&#160;semanas&#41; foi obtido atrav&#233;s dos arquivos do Laborat&#243;rio de Dermatopatologia&#44; Departamento de Dermatologia&#44; Universidade de S&#227;o Paulo&#46; O estudo foi submetido &#224; Comiss&#227;o de &#201;tica desta institui&#231;&#227;o&#46; Parecer n&#176;&#160;CEP&#58;&#160;0172&#47;08&#46; As regi&#245;es analisadas e padronizadas foram&#58; couro cabeludo&#44; face&#44; superc&#237;lio&#44; membro superior&#44; dorso e genitais&#46; As morfologias das estruturas foram avaliadas previamente em Hematoxilina e eosina para melhor caracteriza&#231;&#227;o das estruturas&#46; Nesses cortes foi feito estudo imuno&#8208;histoqu&#237;mico com os seguintes marcadores&#58; CK1&#44; CK10&#44; CK13&#44; CK14&#44; CK16 e CK20&#46;</p><span id="sec0015" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0050">Protocolo imuno&#8208;histoqu&#237;mico</span><p id="par0040" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os cortes de&#160;3&#160;&#956;m foram desparafinizados e diafanizados em dois banhos de xilol&#46; A seguir os cortes foram reidratados em cadeia descendente de etanol e imersos em solu&#231;&#227;o de hidr&#243;xido de am&#244;nia a&#160;10&#37;&#46; Recupera&#231;&#227;o dos s&#237;tios antig&#234;nicos ocorreu de v&#225;rias formas&#44; dependeu do anticorpo prim&#225;rio usado &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabela 1</a>&#41;&#46;</p><elsevierMultimedia ident="tbl0005"></elsevierMultimedia><p id="par0045" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Ap&#243;s a lavagem&#44; o material foi incubado em solu&#231;&#227;o de per&#243;xido de hidrog&#234;nio 20&#160;volumes&#44; em seguida os cortes foram imersos duas vezes em solu&#231;&#227;o de TRIS Ph&#160;7&#44;4 e posteriormente&#44; foram incubados com solu&#231;&#227;o de&#160;0&#44;5&#37;&#160;BSA &#40;Sigma&#41;&#44; 2&#44;5&#37;&#160;SFB &#40;Cultilab&#41; em TRIS e incubados com o soro prim&#225;rio dilu&#237;do em solu&#231;&#227;o de&#160;1&#37; BSA &#40;Sigma&#41; em TRIS&#46; Os procedimentos posteriores foram sempre precedidos de lavagens no tamp&#227;o TRIS&#46; Ap&#243;s a incuba&#231;&#227;o com o anticorpo prim&#225;rio&#44; os esp&#233;cimes foram incubados com o reagente En Vision &#40;Dako&#41;&#46; Para a revela&#231;&#227;o&#44; os esp&#233;cimes foram incubados na solu&#231;&#227;o com agente DAB &#40;Sigma&#41;&#46; Os cortes histol&#243;gicos foram ent&#227;o contracorados com Hematoxilina de Carazzi e posteriormente desidratados em cadeia ascendente de &#225;lcoois&#44; diafanizados em tr&#234;s banhos de xilol e montados em resina Permount&#174; para o exame microsc&#243;pico&#46; Controles negativos foram feitos atrav&#233;s da incuba&#231;&#227;o de esp&#233;cimes com soro n&#227;o imune&#46; Todas as rea&#231;&#245;es de imuno&#8208;histoqu&#237;mica foram feitas paralelamente com tecidos adultos como controles negativo&#47;positivo&#46;</p><p id="par0050" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os resultados obtidos nas rea&#231;&#245;es imuno&#8208;histoqu&#237;micas foram analisados por dois observadores e tabulados de forma qualitativa&#46; Foram considerados positivos &#40;&#43;&#41; os esp&#233;cimes que apresentaram imunomarca&#231;&#227;o e negativos &#40;&#8208;&#41; os esp&#233;cimes que n&#227;o apresentaram imunoexpress&#227;o&#46;</p><p id="par0055" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Todos os resultados foram registrados pelo sistema de fotomicrografia digital Axio Vision &#40;Zeiss e Axiophot&#41;&#46;</p></span></span><span id="sec0020" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0055">Resultados</span><p id="par0060" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Foram avaliados&#160;73&#160;esp&#233;cimes provenientes de &#225;reas pilosas de embri&#245;es ou fetos que variaram de&#160;4&#8208;25&#160;semanas de idade gestacional&#46; Foram avaliados os seguintes marcadores&#58; CK1&#44; CK10&#44; CK13&#44; CK14&#44; CK16&#44; CK20&#44; nas regi&#245;es como&#58; couro cabeludo&#44; face&#44; superc&#237;lio&#44; membro superior&#44; dorso e genitais e os resultados podem ser avaliados na <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0010">tabela 2</a> e <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0005">figura 1</a>&#46; Analisamos todos os casos obtidos nos arquivos do Laborat&#243;rio de Dermatopatologia referente a &#225;reas pilosas de cada marcador&#46; Foram obtidos 12&#160;esp&#233;cimes para CK1&#59; 14&#160;esp&#233;cimes para CK14&#59; 9&#160;esp&#233;cimes para CK10&#59; 10&#160;esp&#233;cimes para CK13&#59; 21&#160;esp&#233;cimes para CK16 e apenas 7&#160;esp&#233;cimes para CK20&#46;</p><elsevierMultimedia ident="tbl0010"></elsevierMultimedia><elsevierMultimedia ident="fig0005"></elsevierMultimedia><span id="sec0025" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0060">CK1&#44; CK14&#44; CK10 e CK13</span><p id="par0065" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A imunomarca&#231;&#227;o para CK1&#44; CK10&#44; CK13 foi notada a partir da&#160;12&#170;&#160;semana gesta&#231;&#227;o nos fol&#237;culos pilosos primitivos e at&#233; a&#160;25&#170;&#160;semana gestacional nos fol&#237;culos mais plenamente desenvolvidos&#59; 25&#37;&#44; 55&#37;&#44; 70&#37; das l&#226;minas marcaram positivamente para a CK1&#44; CK10 e CK13 respectivamente&#44; na BRE&#44; no territ&#243;rio do &#243;stio folicular&#44; infund&#237;bulo&#44; gl&#226;ndula seb&#225;cea e papila d&#233;rmica&#46; As principais regi&#245;es marcadas foram a p&#225;lpebra&#44; face e genital&#46; A imunomarca&#231;&#227;o para CK14 foi vista em fol&#237;culos primitivos de embri&#245;es de&#160;9&#160;semanas de gesta&#231;&#227;o na regi&#227;o do membro superior e dorso e at&#233; em fol&#237;culos mais desenvolvidos com&#160;21&#160;semanas gestacionais&#59; 100&#37; dos casos marcaram positivamente para a CK14&#44; na BRE&#46; Todas as regi&#245;es analisadas foram marcadas&#46;</p></span><span id="sec0030" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0065">CK16 e CK20</span><p id="par0070" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A imunomarca&#231;&#227;o para CK16 foi vista em fol&#237;culos primitivos de embri&#245;es de&#160;12&#160;semanas de gesta&#231;&#227;o na regi&#227;o da face at&#233; em fol&#237;culos mais desenvolvidos com&#160;23&#160;semanas gestacionais&#59; 61&#37; das l&#226;minas marcaram positivamente para a CK16&#44; na BRE&#46; Todas as regi&#245;es analisadas foram marcadas&#46; A imunomarca&#231;&#227;o para CK20 foi vista em fol&#237;culos primitivos de embri&#245;es de&#160;14&#160;semanas de gesta&#231;&#227;o na regi&#227;o do couro cabeludo at&#233; fol&#237;culos mais desenvolvidos com&#160;25&#160;semanas gestacionais&#59; 57&#37; fetos marcaram para CK20&#44; no territ&#243;rio da BRE e papila d&#233;rmica&#46; Todas as regi&#245;es analisadas foram marcadas&#46;</p></span></span><span id="sec0035" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0070">Discuss&#227;o</span><p id="par0075" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Este estudo avaliou o padr&#227;o de express&#227;o das CK no fol&#237;culo piloso humano em desenvolvimento&#46; Existem poucos trabalhos na literatura sobre esse tema&#46;</p><p id="par0080" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Schirren et al&#46; foram os pioneiros em mostrar que as c&#233;lulas foliculares germinativas do placoide folicular fetal humano expressavam CK5&#44; CK6&#44; CK14&#44; CK17 e CK19 e que posteriormente&#44; com desenvolvimento folicular&#44; o padr&#227;o de express&#227;o nas CKs de cada por&#231;&#227;o do fol&#237;culo piloso se alterava&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0175"><span class="elsevierStyleSup">14</span></a></p><p id="par0170" class="elsevierStylePara elsevierViewall">De acordo com os dados obtidos verificou&#8208;se que entre nove&#160;e&#160;14 semanas gestacionais&#44; CK1&#44; CK14&#44; CK10&#44; CK13&#44; CK16 e CK20 tornaram&#8208;se expressas&#46; Apenas dois dos nossos marcadores foram avaliados por Schirren et al&#46;&#44; a CK14 e CK10&#46; Essas CKs foram encontradas nos fol&#237;culos pilosos em desenvolvimento&#44; a CK14 nas fases mais iniciais ainda na fase de placoide e tamb&#233;m posteriormente&#46; J&#225; a CK10 num fol&#237;culo piloso um pouco mais diferenciado&#44; na regi&#227;o do istmo na BRE&#44; nas c&#233;lulas suprabasais do infundibulum junto com CK14&#46; Os resultados desse trabalho foram semelhantes aos nossos&#44; a imunomarca&#231;&#227;o manteve o padr&#227;o cr&#226;nio caudal de distribui&#231;&#227;o&#46;</p><p id="par0090" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Segundo os dados obtidos&#44; a CK14 foi a primeira a ser expressa em embri&#245;es com menos de&#160;12&#160;semanas de vida&#44; em torno da 9&#170;&#160;semana gestacional&#46; Inicialmente&#44; tanto a CK1 e quanto a CK14 foram expressas na regi&#227;o no istmo&#46; Estudos que envolveram as CK1 e Ck14 mostraram que a express&#227;o de CK1 ocorre em todas as camadas epid&#233;rmicas&#44; enquanto que a express&#227;o de CK14 predominava na regi&#227;o epid&#233;rmica perifolicular&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180"><span class="elsevierStyleSup">15</span></a></p><p id="par0095" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Observa&#8208;se tambem que a CK1&#44; CK10&#44; CK13 e CK16 foram expressas com&#160;12&#160;semanas de idade gestacional&#46; Estudos que envolveram as Ck1 e Ck14 atrav&#233;s da via de sinaliza&#231;&#227;o Shh mostraram achados conflitantes&#46; Na superexpress&#227;o da CK1&#44; os camundongos no per&#237;odo embrion&#225;rio foram incapazes de desenvolver fol&#237;culos pilosos&#46; No outro modelo experimental&#44; na superexpress&#227;o da CK14&#44; ocorreu uma hiperprolifera&#231;&#227;o folicular&#44; al&#233;m de m&#250;ltiplas les&#245;es tipo carcinoma basocelular nos animais analisados&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">16&#44;17</span></a></p><p id="par0100" class="elsevierStylePara elsevierViewall">&#201; descrito na literatura que a hiperprolifera&#231;&#227;o das camadas epiteliais ocasionada por uma superexpress&#227;o de CK1 durante o desenvolvimento embrion&#225;rio altera a capacidade das c&#233;lulas basais de iniciar um programa de diferencia&#231;&#227;o celular adequado para forma&#231;&#227;o dos fol&#237;culos pilosos&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">16</span></a> Assim&#44; as CK1 e CK14 t&#234;m um papel importante na forma&#231;&#227;o do fol&#237;culo piloso fetal atrav&#233;s da cascata de sinaliza&#231;&#227;o Shh&#46; O exato tempo&#44; localiza&#231;&#227;o e concentra&#231;&#227;o da express&#227;o dessas CKs nessa via de sinaliza&#231;&#227;o Shh afetam o fen&#243;tipo dos fol&#237;culos pilosos no per&#237;odo fetal embrion&#225;rio&#44; mas sem altera&#231;&#245;es nos fol&#237;culos pilosos p&#243;s&#8208;natais&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">16</span></a></p><p id="par0105" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A CK10 &#233; uma CK epitelial classicamente relacionada &#224; hiperceratose epidermol&#237;tica&#44; seu moisacismo e muta&#231;&#245;es eventuais podem estar relacionadas a essa doen&#231;a ou doen&#231;as que a mimetizam&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0195"><span class="elsevierStyleSup">18</span></a> Em nosso trabalho a CK10 imunomarcou os fol&#237;culos pilosos na BRE&#44; assim como CK1 e CK14&#46;</p><p id="par0110" class="elsevierStylePara elsevierViewall">No presente estudo&#44; a CK16 foi expressa em regi&#245;es mais proliferativas do fol&#237;culo piloso&#44; principalmente na regi&#227;o do bulbo&#46; A CK16&#44; assim como as CK6 e CK17&#44; &#233; uma CK proliferativa e de repara&#231;&#227;o&#44; &#233; expressa em estados patol&#243;gicos e ao redor de tecidos em cicatriza&#231;&#227;o&#46; Corroborando os nossos achados&#44; &#233; descrito que essas CKs hiperproliferativas s&#227;o expressas nos fol&#237;culos pilosos em desenvolvimento&#44; quando j&#225; existe uma diferencia&#231;&#227;o epitelial&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0175"><span class="elsevierStyleSup">14</span></a></p><p id="par0115" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A CK13 &#233; uma CK epitelial j&#225; usada como imunomarcadora de neoplasia intraepitelial oral&#46; Mais recentemente foi avaliada sua express&#227;o junto com a CK17&#44; como imunomarcador para neoplasia intraepitelial vulvar&#46; No fol&#237;culo piloso em desenvolvimento foi observada em nosso trabalho imunomarcando a BRE dos fol&#237;culos pilosos fetais em desenvolvimento&#44; assim como as outras CK epiteliais&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0205"><span class="elsevierStyleSup">19</span></a></p><p id="par0120" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A CK20 &#233; um marcador para as c&#233;lulas de Merkel&#46; Assim como na literatura&#44; a sua imunoexpress&#227;o foi detectada em fol&#237;culos pilosos em um est&#225;gio mais avan&#231;ado de desenvolvimento&#44; a partir da 14&#170;&#160;semana de idade gestacional&#46; A literatura relata presen&#231;a de c&#233;lulas de Merkel na BRE de fol&#237;culos pilosos de vibrissas de roedores&#46; Em humanos&#44; nos fol&#237;culos pilosos fetais primitivos&#44; a CK20 foi marcada na camada basal do infund&#237;bulo&#44; mas n&#227;o em &#225;reas profundas dos fol&#237;culos pilosos&#44; inclusive o bulbo e a derme&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0210"><span class="elsevierStyleSup">20</span></a> No nosso trabalho&#44; conforme a literatura&#44; encontramos express&#227;o para CK20 nos fol&#237;culos pilosos j&#225; desenvolvidos em torno da 25&#170;&#160;semana gestacional na regi&#227;o da papila d&#233;rmica e na BRE&#44; por&#233;m tamb&#233;m em fol&#237;culos em per&#237;odo intermedi&#225;rio de desenvolvimento com&#160;14&#160;semanas gestacionais&#46;</p></span><span id="sec0040" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0075">Conclus&#227;o</span><p id="par0125" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A morfog&#234;nese do fol&#237;culo piloso &#233; uma reestrutura&#231;&#227;o do tecido epitelial e do tecido mesenquimal para formar uma unidade pilosseb&#225;cea completamente diferenciada&#46; N&#243;s observamos que os padr&#245;es de express&#227;o das CKs durante o desenvolvimento dos fol&#237;culos pilosos s&#227;o din&#226;micos como visto por outros autores na epiderme&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180"><span class="elsevierStyleSup">15</span></a> As CKs iniciam sua express&#227;o nos fol&#237;culos pilosos humanos em torno da&#160;9&#170;&#160;semana de idade gestacional&#44; a CK14 &#233; a primeira a ser identificada e com a maior percentual de marca&#231;&#227;o&#46; Nossos dados confirmam a literatura que mostra que as CKs s&#227;o marcadores de matura&#231;&#227;o do desenvolvimento dos fol&#237;culos pilosos e s&#227;o expressas a partir da fase de placoide folicular&#46; Inicialmente a express&#227;o dessas CKs coincide com as CKs expressas no epit&#233;lio primitivo&#58; CK1&#44; CK14&#44; CK10&#44; CK13 e a CK proliferativa&#58; CK16&#46; Como previamente relatado na literatura&#44; a CK20 foi expressa em fol&#237;culos pilosos mais desenvolvidos a partir da 14&#170;&#160;semana gestacional&#46; Os resultados quando colocados em conjunto indicam que desde as fases mais precoces do desenvolvimento folicular os fol&#237;culos pilosos progressivamente e coordenadamente se preparam para proteger a pele do feto para o parto e est&#237;mulo ambiental&#46; As compreens&#245;es dessas etapas de matura&#231;&#227;o s&#227;o importantes para o entendimento da estrutura dos fol&#237;culos pilosos normais e sua fun&#231;&#227;o no adulto na sa&#250;de e na doen&#231;a&#46; Nosso trabalho serviu para preencher uma lacuna na literatura sobre um tema pouco estudado&#46; N&#243;s tamb&#233;m acreditamos que se identificarmos os padr&#245;es de diferencia&#231;&#227;o das CKs nos fol&#237;culos pilosos em humanos podemos gerar questionamentos e incitar investiga&#231;&#245;es&#44; al&#233;m de abrir possibilidade para terapias regenerativas&#44; identifica&#231;&#227;o de biomarcadores precoces e potenciais alvos diagn&#243;sticos para as doen&#231;as do fol&#237;culo piloso&#46; Entretanto&#44; s&#227;o necess&#225;rios outros estudos investigativos para avaliar melhor o desenvolvimento e express&#227;o proteica dos fol&#237;culos pilosos humanos e colaborar no diagn&#243;stico e tratamento das doen&#231;as relacionadas a essa estrutura&#46;</p></span><span id="sec0045" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0080">Suporte financeiro</span><p id="par0130" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Fundo de Apoio &#224; Dermatologia &#40;Funaderm&#41;&#44; da Sociedade Brasileira de Dermatologia&#46; Coordena&#231;&#227;o de Aperfei&#231;oamento de Pessoal de N&#237;vel Superior &#40;Capes&#41;&#46;</p></span><span id="sec0050" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0085">Contribui&#231;&#227;o dos autores</span><p id="par0135" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Laura Maria Andrade Silva&#58; An&#225;lise estat&#237;stica&#59; aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; elabora&#231;&#227;o e reda&#231;&#227;o do manuscrito&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o dos dados&#59; participa&#231;&#227;o efetiva na orienta&#231;&#227;o da pesquisa&#59; participa&#231;&#227;o intelectual em conduta proped&#234;utica e&#47;ou terap&#234;utica de casos estudados&#59; revis&#227;o cr&#237;tica da literatura&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#46;</p><p id="par0140" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Ricardo HSIEH&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; concep&#231;&#227;o e planejamento do estudo&#59; participa&#231;&#227;o efetiva na orienta&#231;&#227;o da pesquisa&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#46;</p><p id="par0145" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Silvia Vanessa Lourenco&#58; Concep&#231;&#227;o e planejamento do estudo&#59; participa&#231;&#227;o efetiva na orienta&#231;&#227;o da pesquisa&#59; participa&#231;&#227;o intelectual em conduta proped&#234;utica e&#47;ou terap&#234;utica de casos estudados&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#46;</p><p id="par0150" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Neusa Yuriko Sakai Valente&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; concep&#231;&#227;o e planejamento do estudo&#59; participa&#231;&#227;o efetiva na orienta&#231;&#227;o da pesquisa&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#46;</p><p id="par0155" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Geise Rezende Paiva&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o dos dados&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#46;</p><p id="par0160" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Juliana Dumet Fernandes&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; concep&#231;&#227;o e planejamento do estudo&#59; elabora&#231;&#227;o e reda&#231;&#227;o do manuscrito&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o dos dados&#59; participa&#231;&#227;o intelectual em conduta proped&#234;utica e&#47;ou terap&#234;utica de casos estudados&#59; revis&#227;o cr&#237;tica da literatura&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#46;</p></span><span id="sec0055" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0090">Conflitos de interesse</span><p id="par0165" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Nenhum&#46;</p></span></span>"
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Anticorpo prim&#225;rio&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Clone&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Empresa&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Recupera&#231;&#227;o antig&#234;nica&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Dilui&#231;&#227;o&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Incuba&#231;&#227;o&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">Citoqueratina 1&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">&#8220;Overnight&#8221;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="\n
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                  \t\t\t\t">Micro&#8208;ondas&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">1&#58;40&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">&#8220;Overnight&#8221;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="\n
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                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">DE&#8208;K10&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t">Dako&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">Micro&#8208;ondas&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="\n
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                  \t\t\t\t">Micro&#8208;ondas&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">&#8220;Overnight&#8221;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="\n
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                  \t\t\t\t">Citoqueratina 13&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">M 7003&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">Dako&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">Micro&#8208;ondas&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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                  \t\t\t\t">&#8220;Overnight&#8221;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="\n
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                  \t\t\t\t">Citoqueratina 20&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Marcador&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Percentual de marca&#231;&#227;o&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th><th class="td" title="\n
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                  \t\t\t\t" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Idade gestacional inicial de marca&#231;&#227;o&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t\t\t</th></tr></thead><tbody title="tbody"><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="\n
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                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="\n
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Informação do artigo
ISSN: 26662752
Idioma original: Português
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