Investigação
Padronização de cultura organoide para avaliação da melanogênese induzida por UVB, UVA e luz visível
Thainá Oliveira Felicio Olivattia, Giovana Piteri Alcantarab, Ana Cláudia Cavalcante Espósito Lemosc, Márcia Guimarães da Silvad, Hélio Amante Miotb,
Autor para correspondência
a Faculdade de Medicina de Botucatu, Universidade Estadual Paulista, Botucatu, SP, Brasil
b Departamento de Dermatologia e Radioterapia, Faculdade de Medicina de Botucatu, Universidade Estadual Paulista, Botucatu, SP, Brasil
c Programa de Pós‐Graduação em Patologia, Departamento de Dermatologia e Radioterapia, Faculdade de Medicina de Botucatu, Universidade Estadual Paulista, Botucatu, SP, Brasil
d Departamento de Patologia, Faculdade de Medicina de Botucatu, Universidade Estadual Paulista, Botucatu, SP, Brasil
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biológica de uma intervenção (p.ex., carcinogênese).</p><p id="par0010" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A experimentação animal aumenta a extensão de possibilidades de pesquisa pelo menor custo, maior acessibilidade aos sujeitos e maior controle de exposição e influência ambiental.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0190"><span class="elsevierStyleSup">1</span></a> Entretanto, as respostas fisiológicas dos animais podem não se assemelhar aos humanos (p.ex., melanogênese), o que pode levar a conclusões equivocadas.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0195"><span class="elsevierStyleSup">2</span></a> Além disso, uma série de doenças cutâneas não tem modelos animais (p.ex., melasma), leva à necessidade de outros processos investigativos.</p><p id="par0015" class="elsevierStylePara elsevierViewall">As simulações computacionais de fenômenos biológicos são uma opção à experimentação com seres vivos e fornecem resultados bastante verossímeis quando simulam interações entre variáveis amplamente conhecidas do ponto de vista experimental. Infelizmente, as variáveis que interferem em processos cutâneos (p.ex., melanogênese) ainda não são completamente elucidadas, assim como sua interação com os demais elementos externos.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0200"><span class="elsevierStyleSup">3</span></a></p><p id="par0020" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Culturas celulares humanas primárias ou de linhagens comerciais (p.ex., HaCaT) são amplamente usadas em pesquisa fisiopatológica ou de resposta a estímulos específicos. Apesar da homologia com os tecidos humanos, as culturas de linhagens celulares não contemplam a interação entre os diferentes tipos celulares que interagem na pele (p.ex., unidade epidermo‐melânica).<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0205"><span class="elsevierStyleSup">4</span></a></p><p id="par0025" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Sistemas comerciais de culturas celulares múltiplas (p.ex., pele 3D: queratinócitos, melanócitos e fibroblastos) são propagados como uma solução para perceber a interação entre as células da pele e são mais propensos a estar relacionados à estrutura tecidual do hospedeiro.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0210"><span class="elsevierStyleSup">5–7</span></a> Entretanto, as linhagens são usualmente de doadores diferentes, com padrões de reprodução algo diverso do que se encontra no tecido; também não apresentam endotélio, células dendríticas, células de Merkel, que, mesmo pouco numerosas no tecido, podem oferecer alguma interação relevante, depende do fenômeno estudado. Além disso, até o momento, culturas 3D e coculturas celulares comerciais de pele ainda não caracterizam certas doenças.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0220"><span class="elsevierStyleSup">7–9</span></a></p><p id="par0030" class="elsevierStylePara elsevierViewall">As culturas organoides são cultivos teciduais primários que mantêm as características arquiteturais e as principais relações entre os diferentes tipos celulares, além da matriz extracelular.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0235"><span class="elsevierStyleSup">10–12</span></a> Apresentam a vantagem adicional de poder ser amostrados a partir da pele sã e da pele com doença do mesmo hospedeiro, favorecem a comparação <span class="elsevierStyleItalic">ex vivo</span> entre os locais.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0250"><span class="elsevierStyleSup">13,14</span></a> A pele é um tecido relativamente viável à cultura organoide, com descrição de manutenção funcional por mais de sete dias à temperatura ambiente.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0245"><span class="elsevierStyleSup">12,15–19</span></a></p><p id="par0035" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A melanogênese é um processo complexo, que depende principalmente da ação da radiação ultravioleta (UVA e UVB) sobre a unidade epidermo‐melânica, com importante regulação parácrina, mas que também sofre interferência de elementos da derme.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0285"><span class="elsevierStyleSup">20,21</span></a> A luz visível (LV) foi descrita como promotora de melanogênese em fototipos elevados e a fração mais biologicamente ativa da LV na pele compreende a faixa azul‐violeta (400‐500 nm).<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0295"><span class="elsevierStyleSup">22</span></a></p><p id="par0040" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Neste estudo, objetivamos o desenvolvimento de um modelo de cultura organoide a partir de um fragmento de pele com vistas ao estudo da melanogênese induzida por diferentes radiações.</p></span><span id="sec0010" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0050">Métodos</span><p id="par0045" class="elsevierStylePara elsevierViewall">O projeto foi aprovado no comitê de ética em pesquisa da instituição (n° 2.700.889) e todos os participantes preencheram o termo de consentimento antes da inclusão no estudo.</p><p id="par0050" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Foram incluídos 10 voluntários adultos (> 18 anos) atendidos no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu (SP), que se submeteram a biópsias da região retroauricular com <span class="elsevierStyleItalic">punch</span> de 3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mm, sob anestesia local (lidocaína 2%), após antissepsia com clorexidina alcoólico (2%) e campo estéril. Os fragmentos foram seccionados no nível da derme profunda para evitar grande quantidade de adipócitos que interferem na completa submersão do fragmento no meio de cultura.</p><p id="par0055" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os fragmentos cilíndricos foram divididos longitudinalmente em duas partes (semicilindros) equivalentes e armazenadas em meio específico DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's medium, Sigma Inc, UK),<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0300"><span class="elsevierStyleSup">23</span></a> em frasco plástico transparente estéril, segundo protocolo estabelecido por Ayres, para cultura organoide (padronização de viabilidade) em temperatura ambiente (20<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C), para posterior dosimetria das radiações para melanogênese.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0305"><span class="elsevierStyleSup">24</span></a> Um fragmento foi irradiado (imediatamente após a coleta) e o outro, mantido ao abrigo da luz por 72 horas.</p><p id="par0060" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os fragmentos foram irradiados com doses crescentes de UVA, UVB e LV a partir de fontes artificiais de UVB (230<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μW/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span>; fonte FS72T12/UVB/HO), UVA (1270<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μW/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span>; fonte Phillips TL 100 W/10R) e luz LED (110 mW/cm<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0195"><span class="elsevierStyleSup">2</span></a> na faixa azul‐violeta; fonte GBRLUX 200W), com distância padronizada de 10 cm. As radiações foram iniciadas como 166<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mJ/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span>, 1,270<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>J/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span> e 40<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>J/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span> e acrescidos 20% de radiação cada amostra consecutiva, até identificar pigmentação diferencial. Foi determinada a absorbância da parede dos frascos plásticos para cada radiação. Um volume de 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mL do meio de cultura foi estabelecido para garantir a submersão do fragmento.</p><p id="par0065" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A viabilidade dos tecidos foi avaliada a partir de parâmetros morfológicos e arquiteturais da histologia (H&E) e a expressão quantitativa do gene constitucional GAPDH (<span class="elsevierStyleItalic">glyceraldehyde‐3‐phosphate dehydrogenase</span>) nas peles recém‐coletadas, <span class="elsevierStyleItalic">versus</span> as cultivadas em 72 horas, por PCR em tempo real. O gene GAPHD codifica uma proteína elementar para a execução de funções celulares básicas (p.ex., metabolismo energético), usada comumente como controle positivo em reações de PCR em tempo real, e representa a manutenção das funções metabólicas basais da célula.</p><p id="par0070" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A quantificação do PCR em tempo real foi feita a partir da amplificação do gene‐alvo GAPDH por <span class="elsevierStyleItalic">primer</span> e sonda validados TaqMan. Alíquotas do cDNA (3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μL) extraído das amostras cutâneas foram submetidas à reação do PCR com o sistema TaqMan. Cada reação usou 15<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μL do TaqMan Gene Expression Master mix (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) e 1,0 a 1,5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>μL do conjunto de primers. A amplificação foi feita em um equipamento ABI7300 (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA) com parâmetros padronizados pelo fabricante. Os dados foram processados pelo SDS Software System 7300 e os resultados expressos como ciclo limiar (Ct) para determinar a expressão do cDNA do GAPHD a partir do número de ciclos necessários para atingir o limite de detecção do sinal fluorescente, que foi predefinido entre 0,2 e 0,3.</p><p id="par0075" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A pigmentação melânica induzida pelas radiações foi padronizada em função das doses de cada radiação em função do aumento de mais de 10% da pigmentação da camada basal, avaliada por análise de imagem digital das lâminas coradas pelo Fontana‐Masson.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0310"><span class="elsevierStyleSup">25</span></a> A padronização foi concluída quando esses critérios fossem atingidos e reproduzidos.</p></span><span id="sec0015" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0055">Resultados</span><p id="par0080" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Padronizou‐se a cultura primária de pele em temperatura ambiente com meio DMEM. As doses de UVB, UVA e LV que induziram melanogênese diferencial foram: 166<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mJ/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span>, 1,524<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>J/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span> e 40<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>J/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span> (componente luz azul‐violeta). A absorbância dos frascos plásticos foi de cerca de 50% para todas as radiações.</p><p id="par0085" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A melanogênese da camada basal pôde ser percebida pela coloração de Fontana‐Masson após 72 horas de cultura (<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#fig0005">figs. 1‐3</a>).</p><elsevierMultimedia ident="fig0005"></elsevierMultimedia><elsevierMultimedia ident="fig0010"></elsevierMultimedia><elsevierMultimedia ident="fig0015"></elsevierMultimedia><p id="par0090" class="elsevierStylePara elsevierViewall">No protocolo validado não foram observados destacamentos epidérmicos, picnose ou necrose de queratinócitos. Uma das culturas apresentou contaminação após 72 horas e foi descartada, total de nove pacientes para a padronização.</p><p id="par0095" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A expressão do gene constitucional GAPHD foi equivalente entre a amostra de pele processada imediatamente após a coleta do tecido e a amostra cultivada por 72 horas no protocolo padronizado (<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0020">fig. 4</a>).</p><elsevierMultimedia ident="fig0020"></elsevierMultimedia></span><span id="sec0020" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0060">Discussão</span><p id="par0100" class="elsevierStylePara elsevierViewall">O presente estudo valida uma opção reprodutível de baixo custo para cultura organoide da pele para o estudo da melanogênese. O modelo padronizado manteve viável a função melanocítica por 72 horas sob temperatura ambiente, permite a investigação da melanogênese induzida por diferentes radiações. Abundância tecidual da pele, fácil acessibilidade à coleta de material, manutenção arquitetural e funcional incentivam o uso de culturas cutâneas organoides na pesquisa dermatológica.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0215"><span class="elsevierStyleSup">6,15,18,25,26</span></a></p><p id="par0105" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Culturas de melanócitos são usadas para estudo de inibidores da melanogênese. Entretanto, em monoculturas, melanócitos irradiados sintetizam mais feomelanina do que eumelanina, que depende da interação com queratinócitos. A investigação de fenômenos ligados à eumelanogênese é favorecida, portanto, por modelos organoides que mantenham a influência de diferentes grupos celulares.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0305"><span class="elsevierStyleSup">24,27</span></a></p><p id="par0110" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Culturas organoides cutâneas que usam meios ar‐líquido são mais empregadas no estudo da queratinização, enquanto culturas em suspensão (como a usada neste estudo) permitem melhor perfusão e viabilidade.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0245"><span class="elsevierStyleSup">12</span></a></p><p id="par0115" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Fragmentos de menor dimensão (p.ex., 2 mm<span class="elsevierStyleSup">2</span>) tendem a apresentar maior viabilidade e preservação arquitetural, devido à embebição mais homogênea pelo meio de cultura e distribuição de oxigênio ao tecido.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0280"><span class="elsevierStyleSup">19,26</span></a> Em nosso estudo, os fragmentos de 3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mm foram seccionados ao meio, com adequada preservação da função. Um dos fragmentos que foi inadvertidamente cultivado sem a secção longitudinal apresentou evidente picnose nuclear no centro da peça (caso não incluído no estudo, dados não mostrados).</p><p id="par0120" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Modernos meios de conservação e transporte de tecidos fornecem subsídio para a formação de bancos de pele e também ao desenvolvimento de culturas organoides para a padronização de experimentos.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0325"><span class="elsevierStyleSup">28–31</span></a> O emprego de soro bovino aumenta o potencial de viabilidade das culturas, porém compromete a arquitetura do tecido em função do tempo.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0245"><span class="elsevierStyleSup">12</span></a> O cultivo em temperatura corporal (37<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>°C) também aumenta a viabilidade do tecido, assim como sua taxa metabólica, potencializa a exploração de fenômenos oxidativos e mitogênicos como os envolvidos na carcinogênese.</p><p id="par0125" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Culturas organoides são mantidas fora da interação com o organismo, sem estímulos térmicos, neurológicos, hormonais, imunitários e sofrem hipóxia, o que penitencia suas propriedades teciduais em função do tempo.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0245"><span class="elsevierStyleSup">12,32</span></a> Os desafios e estímulos aos fragmentos devem ser impostos precocemente a fim de preservar as respostas de maneira mais verossímil.</p><p id="par0130" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A melanogênese da camada basal oriunda do estímulo precoce pôde ser percebida de maneira evidente no modelo proposto. A análise digital da melanogênese basal aumenta a sensibilidade da percepção do fenômeno. Curvas de dose‐resposta para cada tipo de radiação (isoladas ou em combinação) devem ser exploradas posteriormente, assim como a resposta melanogênica no melasma.</p><p id="par0135" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Uma limitação adicional ao uso de fragmentos de pele total para estudos genômicos acontece pela heterogeneidade das células presentes na amostra e o aumento da expressão de um gene não pode ser atribuído a um único tipo celular. Para isso, culturas primárias de células, <span class="elsevierStyleItalic">single‐cell</span>, ou técnicas de microdissecção a laser podem ser usadas.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0350"><span class="elsevierStyleSup">33</span></a></p><p id="par0140" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Culturas organoides cutâneas são mais disponíveis e de menor custo que culturas 3D, apresentam maior complexidade arquitetural, contemplam a totalidade de células residentes (p.ex., endotélio, nervos, mastócitos) e matriz extracelular, podem representar mais adequadamente diferenças topográficas, permitem de maneira semelhante manipulação genética e metabólica, assim como o isolamento celular, e podem ser oriundas primariamente da dermatose, com possibilidade de comparação com a pele normal do mesmo indivíduo. Por outro lado, apresentam cinética menos previsível e não podem ser constituídas a partir de engenharia genética (p.ex., CRISPR, <span class="elsevierStyleItalic">knock‐out genes</span>). Ambas as formas de cultura têm limitação experimental em função do tempo e não mantêm o microbioma cutâneo.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0245"><span class="elsevierStyleSup">12</span></a> Essas características devem ser ponderadas na escolha de modelos experimentais, que devem ser adequadamente padronizados e validados para cada intervenção.</p><p id="par0145" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A irradiação da luz solar, ao meio dia, no interior do Brasil (latitude: 22°53’09“S; longitude: 48°26’42”W; altitude: 804 m; dia 09‐dez‐2018), foi de 0,5 mW/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span> (UVB), 1,7 mW/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span> (UVA) e 0,2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>W/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span> (luz azul‐violeta). Isso leva à hipótese de que menos de 15 minutos de exposição solar desprotegida potencialmente induziriam a pigmentação da camada basal, guardadas as limitações da comparação com as radiações independentes, enquanto o efeito das radiações combinadas, ou com diferentes regimes de fotoproteção, podem apresentar comportamentos diferentes.</p><p id="par0150" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Estudos experimentais <span class="elsevierStyleItalic">in vivo</span> resultaram em pigmentação cutânea efetiva a partir de 40<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>J/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span> em indivíduos melanodérmicos (Fitzpatrick IV e V), mas não em fototipos claros. Já a pigmentação por UVA1 (340‐400<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>nm) pôde ser percebida a partir de 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>J/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span> em participantes com fototipos mais escuros.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0355"><span class="elsevierStyleSup">34</span></a></p><p id="par0155" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Radiações solares representam um <span class="elsevierStyleItalic">continuum</span> de frequências eletromagnéticas que interagem com os tecidos biológicos e promovem estímulos diversos.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0360"><span class="elsevierStyleSup">35</span></a> Por razões de sistematização, os efeitos biológicos das radiações são estudados a partir de comprimentos de onda separados, porém há certa interação entre eles.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0365"><span class="elsevierStyleSup">36</span></a> No caso da pigmentação cutânea, a LV promove maior intensidade e persistência à pigmentação induzida pelo UVA1.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0295"><span class="elsevierStyleSup">22,37</span></a></p><p id="par0160" class="elsevierStylePara elsevierViewall">As fontes de UVA, UVB e LV deste estudo promoveram irradiações independentes, já que não apresentaram leituras significativas dos outros comprimentos de onda (dados não mostrados). Isso pode ser relevante porque estudos clássicos de pigmentação, como o de Mahmoud et al., empregaram fontes de LV que emitiam 0,19% de UVA e 1,5% de infravermelho; assim como fontes de UVA1, que apresentavam 0,12% de UVA2 e 0,0001% de UVB.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0355"><span class="elsevierStyleSup">34</span></a> O efeito da heterogeneidade das radiações nos grupos dificulta sua comparação com resultados de fontes homogêneas.</p></span><span id="sec0025" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0065">Conclusão</span><p id="par0165" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Foi padronizado um modelo de cultura organoide para avaliação da melanogênese induzida por UVB, UVA e LV.</p></span><span id="sec0030" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0070">Suporte financeiro</span><p id="par0170" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Fundo de Apoio à Dermatologia de São Paulo (Funader‐SP).</p></span><span id="sec0035" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0075">Contribuição dos autores</span><p id="par0175" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Thainá Oliveira Felicio Olivatti: Aprovação da versão final do manuscrito; concepção, análise e interpretação dos dados; participação intelectual em conduta propedêutica e/ou terapêutica de casos estudados.</p><p id="par0180" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Giovana Piteri Alcantara: Aprovação da versão final do manuscrito; concepção e planejamento do estudo; concepção, análise e interpretação dos dados; participação efetiva na orientação da pesquisa; revisão crítica da literatura.</p><p id="par0185" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Ana Cláudia Cavalcante Espósito Lemos: Aprovação da versão final do manuscrito; concepção e planejamento do estudo; composição do manuscrito; participação efetiva na orientação da pesquisa; participação intelectual em conduta propedêutica e/ou terapêutica de casos estudados; revisão crítica da literatura; revisão crítica do manuscrito.</p><p id="par0190" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Márcia Guimarães da Silva: Composição do manuscrito; concepção, análise e interpretação dos dados; participação efetiva na orientação da pesquisa.</p><p id="par0195" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Hélio Amante Miot: Aprovação da versão final do manuscrito; concepção e planejamento do estudo; composição do manuscrito; concepção, análise e interpretação dos dados; participação efetiva na orientação da pesquisa; participação intelectual em conduta propedêutica e/ou terapêutica de casos estudados; revisão crítica da literatura; revisão crítica do manuscrito.</p></span><span id="sec0040" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0080">Conflitos de interesse</span><p id="par0200" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Nenhum.</p></span></span>" "textoCompletoSecciones" => array:1 [ "secciones" => array:11 [ 0 => array:3 [ "identificador" => "xres1322070" "titulo" => "Resumo" "secciones" => array:6 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "abst0005" "titulo" => "Fundamentos" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "abst0010" "titulo" => "Objetivo" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "abst0015" "titulo" => "Método" ] 3 => array:2 [ "identificador" => "abst0020" "titulo" => "Resultados" ] 4 => array:2 [ "identificador" => "abst0025" "titulo" => "Limitações do estudo" ] 5 => array:2 [ "identificador" => "abst0030" "titulo" => "Conclusões" ] ] ] 1 => array:2 [ "identificador" => "xpalclavsec1219445" "titulo" => "Palavras‐chave" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "sec0005" "titulo" => "Introdução" ] 3 => array:2 [ "identificador" => "sec0010" "titulo" => "Métodos" ] 4 => array:2 [ "identificador" => "sec0015" "titulo" => "Resultados" ] 5 => array:2 [ "identificador" => "sec0020" "titulo" => "Discussão" ] 6 => array:2 [ "identificador" => "sec0025" "titulo" => "Conclusão" ] 7 => array:2 [ "identificador" => "sec0030" "titulo" => "Suporte financeiro" ] 8 => array:2 [ "identificador" => "sec0035" "titulo" => "Contribuição dos autores" ] 9 => array:2 [ "identificador" => "sec0040" "titulo" => "Conflitos de interesse" ] 10 => array:1 [ "titulo" => "Referências" ] ] ] "pdfFichero" => "main.pdf" "tienePdf" => true "fechaRecibido" => "2019-04-09" "fechaAceptado" => "2019-06-13" "PalabrasClave" => array:1 [ "pt" => array:1 [ 0 => array:4 [ "clase" => "keyword" "titulo" => "Palavras‐chave" "identificador" => "xpalclavsec1219445" "palabras" => array:3 [ 0 => "Fotobiologia" 1 => "Melanose" 2 => "Organoides" ] ] ] ] "tieneResumen" => true "resumen" => array:1 [ "pt" => array:3 [ "titulo" => "Resumo" "resumen" => "<span id="abst0005" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0010">Fundamentos</span><p id="spar0005" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">Culturas organoides são cultivos primários que mantêm características arquiteturais, relações entre as células e matriz extracelular. São opções para investigação fisiopatológica ou terapêutica, comparados aos ensaios animais e <span class="elsevierStyleItalic">in vitro</span>.</p></span> <span id="abst0010" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0015">Objetivo</span><p id="spar0010" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">Desenvolvimento de modelo de cultura organoide cutânea, com vistas ao estudo da melanogênese induzida por radiações.</p></span> <span id="abst0015" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0020">Método</span><p id="spar0015" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">Estudo de validação, que envolveu biópsias da pele retroauricular de adultos. Uma amostra foi irradiada com diferentes doses de UVB, UVA ou luz visível e a outra, mantida ao abrigo da luz por 72 horas. A viabilidade dos tecidos foi avaliada a partir de parâmetros morfológicos e arquiteturais da histologia e a expressão do gene GAPDH, por PCR em tempo real. A pigmentação melânica induzida pelas radiações foi padronizada em função das doses de cada radiação e avaliada por análise de imagem digital (Fontana‐Masson).</p></span> <span id="abst0020" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0025">Resultados</span><p id="spar0020" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">Padronizou‐se a cultura primária de pele em temperatura ambiente, com meio DMEM. As doses de UVB, UVA e LV (luz azul) que induziram melanogênese diferencial foram: 166 mJ/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span>, 1,524<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>J/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span> e 40<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>J/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span>. A expressão do gene constitucional GAPHD não diferiu entre a amostra de pele processada imediatamente após a coleta do tecido e a amostra cultivada por 72 horas no protocolo padronizado.</p></span> <span id="abst0025" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0030">Limitações do estudo</span><p id="spar0025" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">Estudo preliminar que avaliou apenas a viabilidade e integridade do sistema melanogênico e o efeito das radiações isoladamente.</p></span> <span id="abst0030" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0035">Conclusões</span><p id="spar0030" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">O modelo padronizado manteve viável a função melanocítica por 72 horas sob temperatura ambiente, tornou possível a investigação da melanogênese induzida por diferentes radiações.</p></span>" "secciones" => array:6 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "abst0005" "titulo" => "Fundamentos" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "abst0010" "titulo" => "Objetivo" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "abst0015" "titulo" => "Método" ] 3 => array:2 [ "identificador" => "abst0020" "titulo" => "Resultados" ] 4 => array:2 [ "identificador" => "abst0025" "titulo" => "Limitações do estudo" ] 5 => array:2 [ "identificador" => "abst0030" "titulo" => "Conclusões" ] ] ] ] "NotaPie" => array:2 [ 0 => array:2 [ "etiqueta" => "☆" "nota" => "<p class="elsevierStyleNotepara" id="npar0005">Como citar este artigo: Olivatti TOF, Alcantara GP, Lemos ACCE, Silva MG, Miot HA. Standardization of organoid culture for evaluation of melanogenesis induced by UVB, UVA and visible light. An Bras Dermatol. 2020;95:46–51.</p>" ] 1 => array:2 [ "etiqueta" => "☆☆" "nota" => "<p class="elsevierStyleNotepara" id="npar0010">Trabalho realizado no Departamento de Dermatologia, Faculdade de Medicina de Botucatu, Universidade Estadual Paulista, Botucatu, SP, Brasil.</p>" ] ] "multimedia" => array:4 [ 0 => array:7 [ "identificador" => "fig0005" "etiqueta" => "Figura 1" "tipo" => "MULTIMEDIAFIGURA" "mostrarFloat" => true "mostrarDisplay" => false "figura" => array:1 [ 0 => array:4 [ "imagen" => "gr1.jpeg" "Alto" => 818 "Ancho" => 2151 "Tamanyo" => 252399 ] ] "descripcion" => array:1 [ "pt" => "<p id="spar0035" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">Corte histológico de cultura organoide (72 horas) de pele retroauricular (Fontana‐Masson, 400×). <span class="elsevierStyleBold">A,</span> Cultura não irradiada; <span class="elsevierStyleBold">B,</span> cultura irradiada com 166<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mJ/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span> de UVB.</p>" ] ] 1 => array:7 [ "identificador" => "fig0010" "etiqueta" => "Figura 2" "tipo" => "MULTIMEDIAFIGURA" "mostrarFloat" => true "mostrarDisplay" => false "figura" => array:1 [ 0 => array:4 [ "imagen" => "gr2.jpeg" "Alto" => 1090 "Ancho" => 2818 "Tamanyo" => 412212 ] ] "descripcion" => array:1 [ "pt" => "<p id="spar0040" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">Corte histológico de cultura organoide (72 horas) de pele retroauricular (Fontana‐Masson, 400×). <span class="elsevierStyleBold">A,</span> Cultura não irradiada; <span class="elsevierStyleBold">B,</span> cultura irradiada com 1,524<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>J/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span> de UVA.</p>" ] ] 2 => array:7 [ "identificador" => "fig0015" "etiqueta" => "Figura 3" "tipo" => "MULTIMEDIAFIGURA" "mostrarFloat" => true "mostrarDisplay" => false "figura" => array:1 [ 0 => array:4 [ "imagen" => "gr3.jpeg" "Alto" => 769 "Ancho" => 2167 "Tamanyo" => 234051 ] ] "descripcion" => array:1 [ "pt" => "<p id="spar0045" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">Corte histológico de cultura organoide (72 horas) de pele retroauricular (Fontana‐Masson, 400×). <span class="elsevierStyleBold">A,</span> Cultura não irradiada; <span class="elsevierStyleBold">B,</span> cultura irradiada com 40<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>J/cm<span class="elsevierStyleSup">2</span> de luz visível (azul‐violeta 400‐500<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>nm).</p>" ] ] 3 => array:7 [ "identificador" => "fig0020" "etiqueta" => "Figura 4" "tipo" => "MULTIMEDIAFIGURA" "mostrarFloat" => true "mostrarDisplay" => false "figura" => array:1 [ 0 => array:4 [ "imagen" => "gr4.jpeg" "Alto" => 1016 "Ancho" => 2917 "Tamanyo" => 186706 ] ] "descripcion" => array:1 [ "pt" => "<p id="spar0050" class="elsevierStyleSimplePara elsevierViewall">Expressão gênica de culturas organoides (72 horas) de pele retroauricular. 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| Ano/Mês | Html | Total | |
|---|---|---|---|
| 2024 Novembro | 30 | 8 | 38 |
| 2024 Outubro | 179 | 83 | 262 |
| 2024 Setembro | 213 | 104 | 317 |
| 2024 Agosto | 223 | 104 | 327 |
| 2024 Julho | 193 | 128 | 321 |
| 2024 Junho | 135 | 82 | 217 |
| 2024 Maio | 103 | 64 | 167 |
| 2024 Abril | 134 | 101 | 235 |
| 2024 Março | 87 | 77 | 164 |
| 2024 Fevereiro | 114 | 81 | 195 |
| 2024 Janeiro | 78 | 54 | 132 |
| 2023 Dezembro | 69 | 50 | 119 |
| 2023 Novembro | 78 | 70 | 148 |
| 2023 Outubro | 70 | 83 | 153 |
| 2023 Setembro | 90 | 74 | 164 |
| 2023 Agosto | 70 | 40 | 110 |
| 2023 Julho | 82 | 41 | 123 |
| 2023 Junho | 92 | 43 | 135 |
| 2023 Maio | 64 | 28 | 92 |
| 2023 Abril | 58 | 21 | 79 |
| 2023 Março | 58 | 42 | 100 |
| 2023 Fevereiro | 53 | 42 | 95 |
| 2023 Janeiro | 50 | 44 | 94 |
| 2022 Dezembro | 46 | 43 | 89 |
| 2022 Novembro | 81 | 59 | 140 |
| 2022 Outubro | 84 | 59 | 143 |
| 2022 Setembro | 73 | 62 | 135 |
| 2022 Agosto | 63 | 65 | 128 |
| 2022 Julho | 35 | 60 | 95 |
| 2022 Junho | 58 | 62 | 120 |
| 2022 Maio | 48 | 55 | 103 |
| 2022 Abril | 59 | 43 | 102 |
| 2022 Março | 55 | 76 | 131 |
| 2022 Fevereiro | 28 | 44 | 72 |
| 2022 Janeiro | 46 | 74 | 120 |
| 2021 Dezembro | 39 | 55 | 94 |
| 2021 Novembro | 77 | 65 | 142 |
| 2021 Outubro | 82 | 89 | 171 |
| 2021 Setembro | 35 | 48 | 83 |
| 2021 Agosto | 57 | 57 | 114 |
| 2021 Julho | 35 | 59 | 94 |
| 2021 Junho | 45 | 78 | 123 |
| 2021 Maio | 60 | 86 | 146 |
| 2021 Abril | 133 | 243 | 376 |
| 2021 Março | 77 | 77 | 154 |
| 2021 Fevereiro | 21 | 19 | 40 |
| 2021 Janeiro | 27 | 25 | 52 |
| 2020 Dezembro | 26 | 21 | 47 |
| 2020 Novembro | 11 | 15 | 26 |
| 2020 Outubro | 12 | 11 | 23 |
| 2020 Setembro | 10 | 11 | 21 |
| 2020 Agosto | 8 | 8 | 16 |
| 2020 Julho | 7 | 11 | 18 |
| 2020 Junho | 10 | 13 | 23 |
| 2020 Maio | 17 | 13 | 30 |
| 2020 Abril | 2 | 2 | 4 |
| 2020 Março | 0 | 3 | 3 |
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