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que ainda n&#227;o foi totalmente compreendida&#46; Est&#225; bem estabelecido que&#44; em geral&#44; o principal mecanismo de defesa contra agentes intracelulares&#44; como a <span class="elsevierStyleItalic">Leishmania</span>&#44; est&#225; associado &#224; ativa&#231;&#227;o da imunidade celular por meio da produ&#231;&#227;o de citocinas T <span class="elsevierStyleItalic">helper</span> 1 &#40;Th1&#41;&#44; como interferon&#8208;gama &#40;IFN&#8208;&#947;&#41;&#44; fator de necrose tumoral alfa &#40;TNF&#8208;&#945;&#41; e interleucina 12 &#40;IL&#8208;12&#41;&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0110"><span class="elsevierStyleSup">3</span></a> Em contraste&#44; a imunidade humoral relacionada &#224; resposta das c&#233;lulas Th2 est&#225; associada &#224; persist&#234;ncia de organismos intracelulares e&#44; portanto&#44; &#224; progress&#227;o da infec&#231;&#227;o&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0115"><span class="elsevierStyleSup">4</span></a> Portanto&#44; a resposta imune Th1 seria adequada e eficaz para destruir o parasito e evitar doen&#231;as ou promover a cura cl&#237;nica&#46; Entretanto&#44; v&#225;rios dados indicam que uma resposta Th1 exagerada e desequilibrada pode causar dano intenso ao tecido e formas cl&#237;nicas mais graves da doen&#231;a&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0120"><span class="elsevierStyleSup">5&#44;6</span></a> De fato&#44; foi demonstrado que o tamanho da &#250;lcera estava positivamente relacionado com as citocinas Th1 circulantes &#40;IFN&#8208;&#947; e TNF&#8208;&#945;&#41; e c&#233;lulas T ativadas&#44; o que confirma essa suposi&#231;&#227;o&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0130"><span class="elsevierStyleSup">7</span></a></p><p id="par0015" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Al&#233;m disso&#44; foi demonstrada uma predomin&#226;ncia <span class="elsevierStyleItalic">in situ</span> de citocinas inflamat&#243;rias Th1 &#40;IFN&#8208;&#947; e IL&#8208;12&#41; em compara&#231;&#227;o &#224;s anti&#8208;inflamat&#243;rias &#40;IL&#8208;10 e IL&#8208;4&#41; antes do tratamento de LC&#44; bem como uma redu&#231;&#227;o significativa dos n&#237;veis de TNF&#8208;&#945; e IFN&#8208;&#947; circulantes ap&#243;s terapia e cura&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0125"><span class="elsevierStyleSup">6&#44;8</span></a> Tamb&#233;m foi demonstrada uma associa&#231;&#227;o entre c&#233;lulas que expressam IL&#8208;17 e a intensidade do infiltrado inflamat&#243;rio&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0140"><span class="elsevierStyleSup">9</span></a></p><p id="par0020" class="elsevierStylePara elsevierViewall">&#201; evidente o importante papel do sistema imunol&#243;gico na patog&#234;nese da LC e suas implica&#231;&#245;es para a cura definitiva&#46; Consequentemente&#44; compreender a evolu&#231;&#227;o da resposta inflamat&#243;ria local e sua rela&#231;&#227;o com a cura da LC por meio da caracteriza&#231;&#227;o do padr&#227;o imunol&#243;gico no local da les&#227;o pode funcionar como um preditor de resultado terap&#234;utico&#46; O objetivo deste estudo foi verificar se a composi&#231;&#227;o celular do infiltrado inflamat&#243;rio&#44; bem como a express&#227;o de CD4&#44; CD8 e IL&#8208;17 no local da les&#227;o&#44; podem estar correlacionados ao resultado terap&#234;utico na LC&#44; dado ainda n&#227;o explorado na literatura&#46;</p></span><span id="sec0010" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0050">M&#233;todos</span><span id="sec0015" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0055">Popula&#231;&#227;o do estudo e seguimento</span><p id="par0025" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os pacientes foram encaminhados ao posto de sa&#250;de de Corte de Pedra&#44; BA&#44; Brasil&#44; uma &#225;rea end&#234;mica de transmiss&#227;o de <span class="elsevierStyleItalic">Leishmania braziliensis</span>&#46; Os pacientes inclu&#237;dos tinham idade de 18 a 65 anos&#59; diagn&#243;stico de LC entre 30 e 90 dias do in&#237;cio da les&#227;o cut&#226;nea&#59; uma a cinco &#250;lceras com di&#226;metro&#44; em seu eixo mais longo&#44; entre 10 e 50<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mm&#46; O diagn&#243;stico foi confirmado por exame histopatol&#243;gico mostrando formas amastigotas ou por exame de PCR positivo para <span class="elsevierStyleItalic">L&#46; braziliensis</span>&#46; Os crit&#233;rios de exclus&#227;o foram gravidez ou amamenta&#231;&#227;o&#44; outras doen&#231;as agudas ou cr&#244;nicas associadas e leishmaniose anterior&#46; Os pacientes que preencheram os crit&#233;rios de inclus&#227;o foram alocados aleatoriamente em tr&#234;s grupos&#58; Glucantime&#174; parenteral &#40;Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span>&#41;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>tamoxifeno oral &#40;TO&#41;&#44; Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>tamoxifeno t&#243;pico &#40;TT&#41; ou apenas Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span> &#40;grupo controle&#41;&#46; Os pacientes foram acompanhados mensalmente durante seis meses para a defini&#231;&#227;o do resultado terap&#234;utico&#59; os detalhes s&#227;o descritos em outro estudo&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0145"><span class="elsevierStyleSup">10</span></a></p></span><span id="sec0020" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0060">Aspectos &#233;ticos</span><p id="par0030" class="elsevierStylePara elsevierViewall">O estudo foi aprovado pelo Comit&#234; de &#201;tica do Hospital Universit&#225;rio Professor Edgard Santos da Bahia&#44; Brasil &#40;Protocolo de Pesquisa n&#176; 106&#47;2009&#41; e pelo Comit&#234; de &#201;tica da Universidade de S&#227;o Paulo &#40;Protocolo de Pesquisa n&#176; 993&#46;562&#41;&#46; O consentimento informado por escrito foi obtido de todos os pacientes inclu&#237;dos&#46;</p></span><span id="sec0025" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0065">Administra&#231;&#227;o dos medicamentos</span><p id="par0035" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Antimoniato de meglumina &#40;Glucantime&#174;&#44; Aventis&#41; foi administrado por via intravenosa na dose de 20<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span>&#47;kg&#47;dia por 20 dias&#59; tamoxifeno oral &#40;Sandoz&#41; na dosagem de 20<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg&#44; 2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#215;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#47;dia durante 20 dias&#59; tamoxifeno 0&#44;1&#37; em creme &#40;medicamento composto&#41; aplicado sobre todas as &#250;lceras 2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#215;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#47;dia durante 20 dias &#40;sem curativo&#41;&#46;</p></span><span id="sec0030" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0070">Avalia&#231;&#227;o de efic&#225;cia</span><p id="par0040" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A cura inicial e definitiva foi definida como a cicatriza&#231;&#227;o completa da&#40;s&#41; les&#227;o&#40;&#245;es&#41; sem infiltra&#231;&#227;o nas bordas&#44; dois e seis meses ap&#243;s o t&#233;rmino do tratamento&#44; respectivamente&#46;</p></span><span id="sec0035" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0075">Bi&#243;psia e histopatologia</span><p id="par0045" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Uma bi&#243;psia por <span class="elsevierStyleItalic">punch</span> de 4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mm foi realizada das bordas das &#250;lceras sob anestesia local antes da terapia&#46; Os fragmentos foram fixados em solu&#231;&#227;o de formalina a 10&#37;&#46; As bi&#243;psias de pele foram submetidas a processamento histol&#243;gico de rotina&#44; e as l&#226;minas foram coradas com Hematoxilina &#38; eosina &#40;H&#38;E&#41; para avalia&#231;&#227;o histopatol&#243;gica &#40;padr&#227;o de inflama&#231;&#227;o &#8211; perivascular ou nodular e difuso &#8211; presen&#231;a de necrose e composi&#231;&#227;o do infiltrado celular&#58; neutr&#243;filos&#44; plasm&#243;citos&#44; linf&#243;citos&#44; eosin&#243;filos&#44; histi&#243;citos&#44; c&#233;lulas epitelioides&#44; c&#233;lulas gigantes&#44; bem como presen&#231;a de formas amastigotas&#41;&#46;</p></span><span id="sec0040" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0080">Imuno&#8208;histoqu&#237;mica</span><p id="par0050" class="elsevierStylePara elsevierViewall">O estudo imuno&#8208;histoqu&#237;mico foi realizado como descrito anteriormente&#44; em 33 bi&#243;psias&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0150"><span class="elsevierStyleSup">11</span></a> Os seguintes anticorpos prim&#225;rios foram usados&#58; anti&#8208;IL&#8208;17 produzido em coelho &#40;Santa Cruz Biotechnology&#44; Santa Cruz&#44; CA&#44; EUA&#41; e anti&#8208;CD8 de camundongo &#40;Dako&#44; Carpinteria&#44; CA&#44; EUA&#41;&#44; anti&#8208;CD4 de camundongo &#40;Dako&#44; Carpinteria&#44; CA&#44; EUA&#41;&#46; IgG anticoelho&#44; anticamundongo biotinilado&#44; &#40;DAKO HRP Advance &#8211; K 4068&#41; foi usado como anticorpo secund&#225;rio&#46; As imagens digitais de todos os cortes histol&#243;gicos imunomarcados foram adquiridos utilizando um microsc&#243;pio &#243;ptico &#40;Nikon E&#8208;600&#41; acoplado a uma c&#226;mera digital Q&#8208;color 1 Olympus com aumento de 400<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#215;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#46; Os n&#237;veis de express&#227;o de T CD4&#44; T CD8 e IL&#8208;17 no infiltrado foram analisados em cinco campos cont&#237;nuos por fragmento e quantificados por medida da &#225;rea de c&#233;lulas coradas&#47;&#225;rea total do campo&#46; O primeiro campo selecionado para quantifica&#231;&#227;o em cada amostra foi o que continha visualmente mais c&#233;lulas imunomarcadas&#46; A quantifica&#231;&#227;o das &#225;reas imunomarcadas foi realizada &#224;s cegas por dois leitores independentes &#40;CSR e VB&#41; utilizando o <span class="elsevierStyleItalic">software</span> Image&#8208;Pro Plus &#40;Media Cybernetics&#41;&#44; e o resultado foi expresso como mediana &#40;quartil 25 a quartil 75&#41;&#46; Os resultados foram correlacionados com as seguintes vari&#225;veis&#58; &#225;rea da les&#227;o&#44; &#225;rea da linfadenopatia&#44; dura&#231;&#227;o da doen&#231;a no dia 0 e resultado terap&#234;utico no sexto m&#234;s&#46;</p></span><span id="sec0045" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0085">An&#225;lise estat&#237;stica</span><p id="par0055" class="elsevierStylePara elsevierViewall">As an&#225;lises estat&#237;sticas foram realizadas com o software SPSS&#174; vers&#227;o 20 para MAC&#174; e tamb&#233;m no Prism 4 &#40;GraphPad Software&#44; San Diego&#44; CA&#44; EUA&#41;&#46; As diferen&#231;as foram consideradas significativas quando p<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;05&#46; As vari&#225;veis cont&#237;nuas foram expressas em mediana&#59; a diferen&#231;a entre tr&#234;s grupos foi calculada pelo teste de Kruskal&#8208;Wallis&#44; e entre dois grupos&#44; pelo teste de Mann&#8208;Whitney&#46; As vari&#225;veis categ&#243;ricas foram expressas em frequ&#234;ncia absoluta e frequ&#234;ncia relativa&#59; para o c&#225;lculo da diferen&#231;a entre tr&#234;s grupos foi utilizado o Teste de Qui&#8208;Quadrado&#44; e entre dois grupos foi realizado o Teste Exato de Fisher&#46; As taxas de cura foram calculadas utilizando ambas as an&#225;lises de inten&#231;&#227;o de tratar &#40;ITT&#41; e por protocolo &#40;PP&#41;&#46;</p></span></span><span id="sec0050" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0090">Resultados</span><span id="sec0055" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0095">Desfechos terap&#234;uticos</span><p id="par0060" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os 38 pacientes com LC foram alocados em tr&#234;s grupos&#58; Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span> &#40;n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>15&#41;&#59; Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>TT &#40;n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>11&#41; e Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>TO &#40;n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>12&#41; &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabela 1</a>&#41;&#46; Durante o seguimento&#44; quatro pacientes n&#227;o completaram o protocolo de tratamento corretamente em decorr&#234;ncia de&#58; rea&#231;&#227;o adversa &#40;dois pacientes&#58; um do grupo Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>TT e outro do grupo Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>TO&#41;&#44; uso de subdose de Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span> &#40;um paciente do grupo Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>TO&#41; e um paciente do grupo controle n&#227;o retornou para as avalia&#231;&#245;es m&#233;dicas ap&#243;s a inclus&#227;o&#46; Esses pacientes foram exclu&#237;dos deste estudo <span class="elsevierStyleItalic">in situ</span>&#46; Al&#233;m disso&#44; um paciente do ensaio cl&#237;nico n&#227;o foi submetido &#224; bi&#243;psia de pele e tamb&#233;m foi exclu&#237;do desta an&#225;lise&#46; Assim&#44; entre 38 pacientes do ensaio cl&#237;nico&#44; 33 fizeram parte deste estudo <span class="elsevierStyleItalic">in situ</span>&#46; Embora n&#227;o significativas&#44; as maiores taxas de cura de 80&#37; e 70&#37; foram observadas no grupo Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>TO&#44; aos dois e seis meses&#44; respectivamente &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabela 1</a>&#41;&#46;</p><elsevierMultimedia ident="tbl0005"></elsevierMultimedia></span><span id="sec0060" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0100">Marcadores imunol&#243;gicos</span><p id="par0065" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A express&#227;o de T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> em les&#245;es de LC antes do tratamento &#233; mostrada na <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0005">figura 1</a>&#46; A an&#225;lise da porcentagem m&#233;dia de c&#233;lulas T CD4<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> e T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> imunomarcadas &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0010">fig&#46; 2</a>&#41; mostrou uma express&#227;o mais alta de c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span>&#46; Para ambas as subpopula&#231;&#245;es&#44; n&#227;o houve diferen&#231;as em sua express&#227;o entre os pacientes que apresentaram cura &#40;n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>17&#41; e aqueles que apresentaram falha &#40;n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>16&#41; em dois meses&#46; A imunomarca&#231;&#227;o com IL&#8208;17 foi maior no grupo que apresentou falha&#44; por&#233;m n&#227;o houve diferen&#231;a significativa entre os grupos de cura e falha &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0010">fig&#46; 2</a>&#41;&#46; Al&#233;m disso&#44; a avalia&#231;&#227;o da express&#227;o de IL&#8208;17&#44; c&#233;lulas T CD4<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> e T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> n&#227;o mostrou diferen&#231;as quando os subgrupos de tratamento foram comparados &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0015">fig&#46; 3</a>&#41;&#46;</p><elsevierMultimedia ident="fig0005"></elsevierMultimedia><elsevierMultimedia ident="fig0010"></elsevierMultimedia><elsevierMultimedia ident="fig0015"></elsevierMultimedia></span><span id="sec0065" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0105">Aspectos histopatol&#243;gicos</span><p id="par0070" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A avalia&#231;&#227;o do infiltrado inflamat&#243;rio mostrou poucas diferen&#231;as entre os casos&#46; A maioria dos pacientes apresentava bi&#243;psias com padr&#227;o inflamat&#243;rio nodular e difuso&#44; e apenas dois pacientes apresentavam padr&#227;o perivascular superficial e profundo&#46; Em todos os casos&#44; as c&#233;lulas inflamat&#243;rias predominantes foram macr&#243;fagos e linf&#243;citos&#46; A maioria tinha neutr&#243;filos &#40;26&#47;33&#59; 78&#37;&#41;&#44; e em 14 casos &#40;42&#37;&#41; foram observadas &#225;reas de necrose na derme&#46; C&#233;lulas gigantes foram identificadas em 13 &#40;39&#37;&#41; les&#245;es&#46; Em tr&#234;s dos 33 fragmentos analisados foi observada uma quantidade significativa de eosin&#243;filos&#46; Plasm&#243;citos foram encontrados no infiltrado inflamat&#243;rio da maioria dos pacientes com LC &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0020">fig&#46; 4</a>&#41;&#46; Curiosamente&#44; os plasm&#243;citos estavam ausentes em 11 indiv&#237;duos &#40;33&#37;&#41;&#44; e todos esses 11 pacientes foram curados em dois meses&#44; com apenas uma recidiva antes de seis meses &#40;p<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;05&#59; <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0025">fig&#46; 5</a>&#41;&#46;</p><elsevierMultimedia ident="fig0020"></elsevierMultimedia><elsevierMultimedia ident="fig0025"></elsevierMultimedia></span></span><span id="sec0070" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0110">Discuss&#227;o</span><p id="par0075" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A patog&#234;nese da LC segue um conjunto complexo de intera&#231;&#245;es entre muitos fatores desencadeados pelas respostas imunes inatas e adquiridas do hospedeiro&#46; Essas respostas inflamat&#243;rias s&#227;o mediadoras do desfecho da infec&#231;&#227;o e express&#227;o da doen&#231;a&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0155"><span class="elsevierStyleSup">12</span></a></p><p id="par0080" class="elsevierStylePara elsevierViewall">O papel das c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> na infec&#231;&#227;o por <span class="elsevierStyleItalic">Leishmania</span> pode estar associado &#224; prote&#231;&#227;o ou dano ao tecido&#44; dependendo das fun&#231;&#245;es efetoras desencadeadas pela infec&#231;&#227;o&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0160"><span class="elsevierStyleSup">13</span></a> No entanto&#44; h&#225; evid&#234;ncias crescentes da associa&#231;&#227;o de c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> com a progress&#227;o da doen&#231;a e altera&#231;&#245;es patol&#243;gicas&#46; H&#225; uma frequ&#234;ncia maior de c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> em &#250;lceras de LC em compara&#231;&#227;o com les&#245;es iniciais de LC antes da ulcera&#231;&#227;o&#59; as c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> de pacientes com les&#245;es ulceradas de LC produziram mais granzima B e tiveram mais atividade citot&#243;xica do que as c&#233;lulas de pacientes com infec&#231;&#227;o subcl&#237;nica&#59; a citotoxicidade mediada por c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> ativa o inflamassoma de NLRP3 em les&#245;es de LC&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0165"><span class="elsevierStyleSup">14&#8211;16</span></a></p><p id="par0085" class="elsevierStylePara elsevierViewall">No presente estudo&#44; observamos uma predomin&#226;ncia de c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> sobre as c&#233;lulas T CD4<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> nas les&#245;es ulceradas pr&#233;&#8208;tratamento&#46; Essa observa&#231;&#227;o refor&#231;a a ideia de que as c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> est&#227;o mais envolvidas na patog&#234;nese da doen&#231;a do que as c&#233;lulas T CD4<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span>&#46; Entretanto&#44; n&#227;o fomos capazes de associar a express&#227;o de c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> ou CD4 <span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> ao resultado terap&#234;utico&#46;</p><p id="par0090" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Tamb&#233;m avaliamos a express&#227;o de IL&#8208;17 decorrente de sua associa&#231;&#227;o direta com o infiltrado inflamat&#243;rio na LC e seu poss&#237;vel papel na doen&#231;a&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0140"><span class="elsevierStyleSup">9</span></a> Embora sua express&#227;o mais alta tenha sido encontrada em um indiv&#237;duo com LC que apresentou falha terap&#234;utica&#44; a compara&#231;&#227;o entre os grupos n&#227;o mostrou diferen&#231;as&#46; &#201; poss&#237;vel que um tamanho de amostra maior&#44; bem como a avalia&#231;&#227;o de outros mediadores inflamat&#243;rios como IL&#8208; ou granzima&#44; possam contribuir para avaliar o perfil de T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> presente nas les&#245;es e fornecer uma correla&#231;&#227;o com o resultado terap&#234;utico com maior precis&#227;o&#46;</p><p id="par0095" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Um dado surpreendente foi a correla&#231;&#227;o entre a aus&#234;ncia de plasm&#243;citos na &#250;lcera antes do tratamento e a cura terap&#234;utica em dois meses em todos os indiv&#237;duos&#44; embora um paciente tenha apresentado recidiva entre dois e seis meses&#46; A presen&#231;a de plasm&#243;citos &#233; reconhecida como uma caracter&#237;stica importante do infiltrado inflamat&#243;rio na LC&#46; Entretanto&#44; o papel exato dos plasm&#243;citos na patog&#234;nese da LC ainda precisa ser determinado e provavelmente foi subestimado&#46; Ridley et al&#46; observaram uma correla&#231;&#227;o positiva significativa entre a presen&#231;a de necrose e a intensidade da infiltra&#231;&#227;o de plasm&#243;citos e linf&#243;citos&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180"><span class="elsevierStyleSup">17</span></a> Por outro lado&#44; bi&#243;psias de pele de les&#245;es de LC n&#227;o ulceradas ou at&#237;picas&#44; presumivelmente com uma rea&#231;&#227;o inflamat&#243;ria menor&#44; apresentaram tamb&#233;m uma quantidade menor de plasm&#243;citos&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">18</span></a> Um grande n&#250;mero de plasm&#243;citos est&#225; normalmente presente nos est&#225;gios finais da les&#227;o de LC&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0190"><span class="elsevierStyleSup">19</span></a> As limita&#231;&#245;es do estudo s&#227;o o baixo n&#250;mero de pacientes e a aus&#234;ncia da avalia&#231;&#227;o de outros marcadores da resposta imune <span class="elsevierStyleItalic">in situ</span>&#46;</p></span><span id="sec0075" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0115">Conclus&#227;o</span><p id="par0100" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Nossos dados sugerem um poss&#237;vel papel dos plasm&#243;citos na patologia da LC e como marcador de resultado terap&#234;utico&#44; uma vez que sua aus&#234;ncia no infiltrado foi associada &#224; cura em todos os casos&#44; com apenas uma recidiva&#46; Avalia&#231;&#227;o adicional de marcadores espec&#237;ficos para c&#233;lulas B e plasm&#243;citos em &#250;lceras de LC&#44; bem como estudos funcionais&#44; devem ser realizados para verificar seu potencial papel patog&#234;nico na LC&#46;</p></span><span id="sec0080" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0120">Suporte financeiro</span><p id="par0105" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Funaderm &#8211; Fundo de Apoio &#224; Dermatologia&#46;</p></span><span id="sec0085" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0125">Contribui&#231;&#227;o dos autores</span><p id="par0110" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Camila Sampaio Ribeiro&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; revis&#227;o cr&#237;tica da literatura&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o de dados&#59; participa&#231;&#227;o intelectual em conduta proped&#234;utica e&#47;ou terap&#234;utica dos casos estudados&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#59; elabora&#231;&#227;o e reda&#231;&#227;o do manuscrito&#46;</p><p id="par0115" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Riam Rocha Fran&#231;a&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o de dados&#59; elabora&#231;&#227;o e reda&#231;&#227;o do manuscrito&#59; an&#225;lise estat&#237;stica&#46;</p><p id="par0120" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Juliana Almeida Silva&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o de dados&#59; elabora&#231;&#227;o e reda&#231;&#227;o do manuscrito&#46;</p><p id="par0125" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Silvana Concei&#231;&#227;o da Silva&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o de dados&#59; elabora&#231;&#227;o e reda&#231;&#227;o do manuscrito&#46;</p><p id="par0155" class="elsevierStylePara elsevierViewall">S&#237;lvia R&#46;B&#46; Uliana&#58; Participa&#231;&#227;o intelectual em conduta proped&#234;utica e&#47;ou terap&#234;utica dos casos estudados&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o de dados&#46;</p><p id="par0130" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Viviane Sampaio Boaventura&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; revis&#227;o cr&#237;tica da literatura&#59; participa&#231;&#227;o efetiva na orienta&#231;&#227;o da pesquisa&#59; participa&#231;&#227;o intelectual em conduta proped&#234;utica e&#47;ou terap&#234;utica dos casos estudados&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#59; elabora&#231;&#227;o e reda&#231;&#227;o do manuscrito&#46;</p><p id="par0135" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Paulo R&#46; L&#46; Machado&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; revis&#227;o cr&#237;tica da literatura&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o de dados&#59; participa&#231;&#227;o efetiva na orienta&#231;&#227;o da pesquisa&#59; participa&#231;&#227;o intelectual em conduta proped&#234;utica e&#47;ou terap&#234;utica dos casos estudados&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#59; elabora&#231;&#227;o e reda&#231;&#227;o do manuscrito&#59; concep&#231;&#227;o e planejamento do estudo&#46;</p></span><span id="sec0090" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0130">Conflito de interesses</span><p id="par0140" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Nenhum&#46;</p></span><span id="sec0095" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0135">Agradecimentos</span><p id="par0145" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Agradecemos ao Dr&#46; Newton Sales Guimar&#227;es &#40;IPAC &#8208; Anatomia Patol&#243;gica e Citopatologia&#41; pelo apoio no processamento de bi&#243;psias de pele para an&#225;lise em H&#38;E&#46;</p><p id="par0150" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Agradecemos a Ana Maria da Silva Carvalho e Cristina dos Santos Vasconcelos Mota pela colabora&#231;&#227;o&#44; auxiliando na realiza&#231;&#227;o da imunomarca&#231;&#227;o das bi&#243;psias de pele&#46;</p></span></span>"
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Artigo original
Infiltrado celular em lesões de leishmaniose cutânea e resultado terapêutico
Camila Sampaio Ribeiroa, Riam Rocha Françab, Juliana Almeida Silvaa, Silvana Conceição da Silvaa, Sílvia R.B. Ulianac, Viviane Sampaio Boaventuraa,b, Paulo R.L. Machadoa,
Corresponding author
prlmachado@hotmail.com

Autor para correspondência.
a Serviço de Imunologia, Hospital Universitário Prof. Edgar Santos, Universidade Federal da Bahia, Salvador, BA, Brasil
b Centro de Pesquisa Goncalo Moniz, Fundação Oswaldo Cruz, Salvador, BA, Brasil
c Laboratório de Leishmaniose, Departamento de Parasitologia, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, São Paulo, SP, Brasil
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que ainda n&#227;o foi totalmente compreendida&#46; Est&#225; bem estabelecido que&#44; em geral&#44; o principal mecanismo de defesa contra agentes intracelulares&#44; como a <span class="elsevierStyleItalic">Leishmania</span>&#44; est&#225; associado &#224; ativa&#231;&#227;o da imunidade celular por meio da produ&#231;&#227;o de citocinas T <span class="elsevierStyleItalic">helper</span> 1 &#40;Th1&#41;&#44; como interferon&#8208;gama &#40;IFN&#8208;&#947;&#41;&#44; fator de necrose tumoral alfa &#40;TNF&#8208;&#945;&#41; e interleucina 12 &#40;IL&#8208;12&#41;&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0110"><span class="elsevierStyleSup">3</span></a> Em contraste&#44; a imunidade humoral relacionada &#224; resposta das c&#233;lulas Th2 est&#225; associada &#224; persist&#234;ncia de organismos intracelulares e&#44; portanto&#44; &#224; progress&#227;o da infec&#231;&#227;o&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0115"><span class="elsevierStyleSup">4</span></a> Portanto&#44; a resposta imune Th1 seria adequada e eficaz para destruir o parasito e evitar doen&#231;as ou promover a cura cl&#237;nica&#46; Entretanto&#44; v&#225;rios dados indicam que uma resposta Th1 exagerada e desequilibrada pode causar dano intenso ao tecido e formas cl&#237;nicas mais graves da doen&#231;a&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0120"><span class="elsevierStyleSup">5&#44;6</span></a> De fato&#44; foi demonstrado que o tamanho da &#250;lcera estava positivamente relacionado com as citocinas Th1 circulantes &#40;IFN&#8208;&#947; e TNF&#8208;&#945;&#41; e c&#233;lulas T ativadas&#44; o que confirma essa suposi&#231;&#227;o&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0130"><span class="elsevierStyleSup">7</span></a></p><p id="par0015" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Al&#233;m disso&#44; foi demonstrada uma predomin&#226;ncia <span class="elsevierStyleItalic">in situ</span> de citocinas inflamat&#243;rias Th1 &#40;IFN&#8208;&#947; e IL&#8208;12&#41; em compara&#231;&#227;o &#224;s anti&#8208;inflamat&#243;rias &#40;IL&#8208;10 e IL&#8208;4&#41; antes do tratamento de LC&#44; bem como uma redu&#231;&#227;o significativa dos n&#237;veis de TNF&#8208;&#945; e IFN&#8208;&#947; circulantes ap&#243;s terapia e cura&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0125"><span class="elsevierStyleSup">6&#44;8</span></a> Tamb&#233;m foi demonstrada uma associa&#231;&#227;o entre c&#233;lulas que expressam IL&#8208;17 e a intensidade do infiltrado inflamat&#243;rio&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0140"><span class="elsevierStyleSup">9</span></a></p><p id="par0020" class="elsevierStylePara elsevierViewall">&#201; evidente o importante papel do sistema imunol&#243;gico na patog&#234;nese da LC e suas implica&#231;&#245;es para a cura definitiva&#46; Consequentemente&#44; compreender a evolu&#231;&#227;o da resposta inflamat&#243;ria local e sua rela&#231;&#227;o com a cura da LC por meio da caracteriza&#231;&#227;o do padr&#227;o imunol&#243;gico no local da les&#227;o pode funcionar como um preditor de resultado terap&#234;utico&#46; O objetivo deste estudo foi verificar se a composi&#231;&#227;o celular do infiltrado inflamat&#243;rio&#44; bem como a express&#227;o de CD4&#44; CD8 e IL&#8208;17 no local da les&#227;o&#44; podem estar correlacionados ao resultado terap&#234;utico na LC&#44; dado ainda n&#227;o explorado na literatura&#46;</p></span><span id="sec0010" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0050">M&#233;todos</span><span id="sec0015" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0055">Popula&#231;&#227;o do estudo e seguimento</span><p id="par0025" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os pacientes foram encaminhados ao posto de sa&#250;de de Corte de Pedra&#44; BA&#44; Brasil&#44; uma &#225;rea end&#234;mica de transmiss&#227;o de <span class="elsevierStyleItalic">Leishmania braziliensis</span>&#46; Os pacientes inclu&#237;dos tinham idade de 18 a 65 anos&#59; diagn&#243;stico de LC entre 30 e 90 dias do in&#237;cio da les&#227;o cut&#226;nea&#59; uma a cinco &#250;lceras com di&#226;metro&#44; em seu eixo mais longo&#44; entre 10 e 50<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mm&#46; O diagn&#243;stico foi confirmado por exame histopatol&#243;gico mostrando formas amastigotas ou por exame de PCR positivo para <span class="elsevierStyleItalic">L&#46; braziliensis</span>&#46; Os crit&#233;rios de exclus&#227;o foram gravidez ou amamenta&#231;&#227;o&#44; outras doen&#231;as agudas ou cr&#244;nicas associadas e leishmaniose anterior&#46; Os pacientes que preencheram os crit&#233;rios de inclus&#227;o foram alocados aleatoriamente em tr&#234;s grupos&#58; Glucantime&#174; parenteral &#40;Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span>&#41;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>tamoxifeno oral &#40;TO&#41;&#44; Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>tamoxifeno t&#243;pico &#40;TT&#41; ou apenas Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span> &#40;grupo controle&#41;&#46; Os pacientes foram acompanhados mensalmente durante seis meses para a defini&#231;&#227;o do resultado terap&#234;utico&#59; os detalhes s&#227;o descritos em outro estudo&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0145"><span class="elsevierStyleSup">10</span></a></p></span><span id="sec0020" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0060">Aspectos &#233;ticos</span><p id="par0030" class="elsevierStylePara elsevierViewall">O estudo foi aprovado pelo Comit&#234; de &#201;tica do Hospital Universit&#225;rio Professor Edgard Santos da Bahia&#44; Brasil &#40;Protocolo de Pesquisa n&#176; 106&#47;2009&#41; e pelo Comit&#234; de &#201;tica da Universidade de S&#227;o Paulo &#40;Protocolo de Pesquisa n&#176; 993&#46;562&#41;&#46; O consentimento informado por escrito foi obtido de todos os pacientes inclu&#237;dos&#46;</p></span><span id="sec0025" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0065">Administra&#231;&#227;o dos medicamentos</span><p id="par0035" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Antimoniato de meglumina &#40;Glucantime&#174;&#44; Aventis&#41; foi administrado por via intravenosa na dose de 20<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span>&#47;kg&#47;dia por 20 dias&#59; tamoxifeno oral &#40;Sandoz&#41; na dosagem de 20<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mg&#44; 2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#215;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#47;dia durante 20 dias&#59; tamoxifeno 0&#44;1&#37; em creme &#40;medicamento composto&#41; aplicado sobre todas as &#250;lceras 2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#215;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#47;dia durante 20 dias &#40;sem curativo&#41;&#46;</p></span><span id="sec0030" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0070">Avalia&#231;&#227;o de efic&#225;cia</span><p id="par0040" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A cura inicial e definitiva foi definida como a cicatriza&#231;&#227;o completa da&#40;s&#41; les&#227;o&#40;&#245;es&#41; sem infiltra&#231;&#227;o nas bordas&#44; dois e seis meses ap&#243;s o t&#233;rmino do tratamento&#44; respectivamente&#46;</p></span><span id="sec0035" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0075">Bi&#243;psia e histopatologia</span><p id="par0045" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Uma bi&#243;psia por <span class="elsevierStyleItalic">punch</span> de 4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mm foi realizada das bordas das &#250;lceras sob anestesia local antes da terapia&#46; Os fragmentos foram fixados em solu&#231;&#227;o de formalina a 10&#37;&#46; As bi&#243;psias de pele foram submetidas a processamento histol&#243;gico de rotina&#44; e as l&#226;minas foram coradas com Hematoxilina &#38; eosina &#40;H&#38;E&#41; para avalia&#231;&#227;o histopatol&#243;gica &#40;padr&#227;o de inflama&#231;&#227;o &#8211; perivascular ou nodular e difuso &#8211; presen&#231;a de necrose e composi&#231;&#227;o do infiltrado celular&#58; neutr&#243;filos&#44; plasm&#243;citos&#44; linf&#243;citos&#44; eosin&#243;filos&#44; histi&#243;citos&#44; c&#233;lulas epitelioides&#44; c&#233;lulas gigantes&#44; bem como presen&#231;a de formas amastigotas&#41;&#46;</p></span><span id="sec0040" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0080">Imuno&#8208;histoqu&#237;mica</span><p id="par0050" class="elsevierStylePara elsevierViewall">O estudo imuno&#8208;histoqu&#237;mico foi realizado como descrito anteriormente&#44; em 33 bi&#243;psias&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0150"><span class="elsevierStyleSup">11</span></a> Os seguintes anticorpos prim&#225;rios foram usados&#58; anti&#8208;IL&#8208;17 produzido em coelho &#40;Santa Cruz Biotechnology&#44; Santa Cruz&#44; CA&#44; EUA&#41; e anti&#8208;CD8 de camundongo &#40;Dako&#44; Carpinteria&#44; CA&#44; EUA&#41;&#44; anti&#8208;CD4 de camundongo &#40;Dako&#44; Carpinteria&#44; CA&#44; EUA&#41;&#46; IgG anticoelho&#44; anticamundongo biotinilado&#44; &#40;DAKO HRP Advance &#8211; K 4068&#41; foi usado como anticorpo secund&#225;rio&#46; As imagens digitais de todos os cortes histol&#243;gicos imunomarcados foram adquiridos utilizando um microsc&#243;pio &#243;ptico &#40;Nikon E&#8208;600&#41; acoplado a uma c&#226;mera digital Q&#8208;color 1 Olympus com aumento de 400<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#215;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#46; Os n&#237;veis de express&#227;o de T CD4&#44; T CD8 e IL&#8208;17 no infiltrado foram analisados em cinco campos cont&#237;nuos por fragmento e quantificados por medida da &#225;rea de c&#233;lulas coradas&#47;&#225;rea total do campo&#46; O primeiro campo selecionado para quantifica&#231;&#227;o em cada amostra foi o que continha visualmente mais c&#233;lulas imunomarcadas&#46; A quantifica&#231;&#227;o das &#225;reas imunomarcadas foi realizada &#224;s cegas por dois leitores independentes &#40;CSR e VB&#41; utilizando o <span class="elsevierStyleItalic">software</span> Image&#8208;Pro Plus &#40;Media Cybernetics&#41;&#44; e o resultado foi expresso como mediana &#40;quartil 25 a quartil 75&#41;&#46; Os resultados foram correlacionados com as seguintes vari&#225;veis&#58; &#225;rea da les&#227;o&#44; &#225;rea da linfadenopatia&#44; dura&#231;&#227;o da doen&#231;a no dia 0 e resultado terap&#234;utico no sexto m&#234;s&#46;</p></span><span id="sec0045" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0085">An&#225;lise estat&#237;stica</span><p id="par0055" class="elsevierStylePara elsevierViewall">As an&#225;lises estat&#237;sticas foram realizadas com o software SPSS&#174; vers&#227;o 20 para MAC&#174; e tamb&#233;m no Prism 4 &#40;GraphPad Software&#44; San Diego&#44; CA&#44; EUA&#41;&#46; As diferen&#231;as foram consideradas significativas quando p<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;05&#46; As vari&#225;veis cont&#237;nuas foram expressas em mediana&#59; a diferen&#231;a entre tr&#234;s grupos foi calculada pelo teste de Kruskal&#8208;Wallis&#44; e entre dois grupos&#44; pelo teste de Mann&#8208;Whitney&#46; As vari&#225;veis categ&#243;ricas foram expressas em frequ&#234;ncia absoluta e frequ&#234;ncia relativa&#59; para o c&#225;lculo da diferen&#231;a entre tr&#234;s grupos foi utilizado o Teste de Qui&#8208;Quadrado&#44; e entre dois grupos foi realizado o Teste Exato de Fisher&#46; As taxas de cura foram calculadas utilizando ambas as an&#225;lises de inten&#231;&#227;o de tratar &#40;ITT&#41; e por protocolo &#40;PP&#41;&#46;</p></span></span><span id="sec0050" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0090">Resultados</span><span id="sec0055" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0095">Desfechos terap&#234;uticos</span><p id="par0060" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os 38 pacientes com LC foram alocados em tr&#234;s grupos&#58; Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span> &#40;n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>15&#41;&#59; Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>TT &#40;n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>11&#41; e Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>TO &#40;n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>12&#41; &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabela 1</a>&#41;&#46; Durante o seguimento&#44; quatro pacientes n&#227;o completaram o protocolo de tratamento corretamente em decorr&#234;ncia de&#58; rea&#231;&#227;o adversa &#40;dois pacientes&#58; um do grupo Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>TT e outro do grupo Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>TO&#41;&#44; uso de subdose de Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span> &#40;um paciente do grupo Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>TO&#41; e um paciente do grupo controle n&#227;o retornou para as avalia&#231;&#245;es m&#233;dicas ap&#243;s a inclus&#227;o&#46; Esses pacientes foram exclu&#237;dos deste estudo <span class="elsevierStyleItalic">in situ</span>&#46; Al&#233;m disso&#44; um paciente do ensaio cl&#237;nico n&#227;o foi submetido &#224; bi&#243;psia de pele e tamb&#233;m foi exclu&#237;do desta an&#225;lise&#46; Assim&#44; entre 38 pacientes do ensaio cl&#237;nico&#44; 33 fizeram parte deste estudo <span class="elsevierStyleItalic">in situ</span>&#46; Embora n&#227;o significativas&#44; as maiores taxas de cura de 80&#37; e 70&#37; foram observadas no grupo Sb<span class="elsevierStyleSup">V</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>TO&#44; aos dois e seis meses&#44; respectivamente &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabela 1</a>&#41;&#46;</p><elsevierMultimedia ident="tbl0005"></elsevierMultimedia></span><span id="sec0060" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0100">Marcadores imunol&#243;gicos</span><p id="par0065" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A express&#227;o de T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> em les&#245;es de LC antes do tratamento &#233; mostrada na <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0005">figura 1</a>&#46; A an&#225;lise da porcentagem m&#233;dia de c&#233;lulas T CD4<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> e T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> imunomarcadas &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0010">fig&#46; 2</a>&#41; mostrou uma express&#227;o mais alta de c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span>&#46; Para ambas as subpopula&#231;&#245;es&#44; n&#227;o houve diferen&#231;as em sua express&#227;o entre os pacientes que apresentaram cura &#40;n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>17&#41; e aqueles que apresentaram falha &#40;n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>16&#41; em dois meses&#46; A imunomarca&#231;&#227;o com IL&#8208;17 foi maior no grupo que apresentou falha&#44; por&#233;m n&#227;o houve diferen&#231;a significativa entre os grupos de cura e falha &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0010">fig&#46; 2</a>&#41;&#46; Al&#233;m disso&#44; a avalia&#231;&#227;o da express&#227;o de IL&#8208;17&#44; c&#233;lulas T CD4<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> e T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> n&#227;o mostrou diferen&#231;as quando os subgrupos de tratamento foram comparados &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0015">fig&#46; 3</a>&#41;&#46;</p><elsevierMultimedia ident="fig0005"></elsevierMultimedia><elsevierMultimedia ident="fig0010"></elsevierMultimedia><elsevierMultimedia ident="fig0015"></elsevierMultimedia></span><span id="sec0065" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0105">Aspectos histopatol&#243;gicos</span><p id="par0070" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A avalia&#231;&#227;o do infiltrado inflamat&#243;rio mostrou poucas diferen&#231;as entre os casos&#46; A maioria dos pacientes apresentava bi&#243;psias com padr&#227;o inflamat&#243;rio nodular e difuso&#44; e apenas dois pacientes apresentavam padr&#227;o perivascular superficial e profundo&#46; Em todos os casos&#44; as c&#233;lulas inflamat&#243;rias predominantes foram macr&#243;fagos e linf&#243;citos&#46; A maioria tinha neutr&#243;filos &#40;26&#47;33&#59; 78&#37;&#41;&#44; e em 14 casos &#40;42&#37;&#41; foram observadas &#225;reas de necrose na derme&#46; C&#233;lulas gigantes foram identificadas em 13 &#40;39&#37;&#41; les&#245;es&#46; Em tr&#234;s dos 33 fragmentos analisados foi observada uma quantidade significativa de eosin&#243;filos&#46; Plasm&#243;citos foram encontrados no infiltrado inflamat&#243;rio da maioria dos pacientes com LC &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0020">fig&#46; 4</a>&#41;&#46; Curiosamente&#44; os plasm&#243;citos estavam ausentes em 11 indiv&#237;duos &#40;33&#37;&#41;&#44; e todos esses 11 pacientes foram curados em dois meses&#44; com apenas uma recidiva antes de seis meses &#40;p<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;05&#59; <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0025">fig&#46; 5</a>&#41;&#46;</p><elsevierMultimedia ident="fig0020"></elsevierMultimedia><elsevierMultimedia ident="fig0025"></elsevierMultimedia></span></span><span id="sec0070" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0110">Discuss&#227;o</span><p id="par0075" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A patog&#234;nese da LC segue um conjunto complexo de intera&#231;&#245;es entre muitos fatores desencadeados pelas respostas imunes inatas e adquiridas do hospedeiro&#46; Essas respostas inflamat&#243;rias s&#227;o mediadoras do desfecho da infec&#231;&#227;o e express&#227;o da doen&#231;a&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0155"><span class="elsevierStyleSup">12</span></a></p><p id="par0080" class="elsevierStylePara elsevierViewall">O papel das c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> na infec&#231;&#227;o por <span class="elsevierStyleItalic">Leishmania</span> pode estar associado &#224; prote&#231;&#227;o ou dano ao tecido&#44; dependendo das fun&#231;&#245;es efetoras desencadeadas pela infec&#231;&#227;o&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0160"><span class="elsevierStyleSup">13</span></a> No entanto&#44; h&#225; evid&#234;ncias crescentes da associa&#231;&#227;o de c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> com a progress&#227;o da doen&#231;a e altera&#231;&#245;es patol&#243;gicas&#46; H&#225; uma frequ&#234;ncia maior de c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> em &#250;lceras de LC em compara&#231;&#227;o com les&#245;es iniciais de LC antes da ulcera&#231;&#227;o&#59; as c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> de pacientes com les&#245;es ulceradas de LC produziram mais granzima B e tiveram mais atividade citot&#243;xica do que as c&#233;lulas de pacientes com infec&#231;&#227;o subcl&#237;nica&#59; a citotoxicidade mediada por c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> ativa o inflamassoma de NLRP3 em les&#245;es de LC&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0165"><span class="elsevierStyleSup">14&#8211;16</span></a></p><p id="par0085" class="elsevierStylePara elsevierViewall">No presente estudo&#44; observamos uma predomin&#226;ncia de c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> sobre as c&#233;lulas T CD4<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> nas les&#245;es ulceradas pr&#233;&#8208;tratamento&#46; Essa observa&#231;&#227;o refor&#231;a a ideia de que as c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> est&#227;o mais envolvidas na patog&#234;nese da doen&#231;a do que as c&#233;lulas T CD4<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span>&#46; Entretanto&#44; n&#227;o fomos capazes de associar a express&#227;o de c&#233;lulas T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> ou CD4 <span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> ao resultado terap&#234;utico&#46;</p><p id="par0090" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Tamb&#233;m avaliamos a express&#227;o de IL&#8208;17 decorrente de sua associa&#231;&#227;o direta com o infiltrado inflamat&#243;rio na LC e seu poss&#237;vel papel na doen&#231;a&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0140"><span class="elsevierStyleSup">9</span></a> Embora sua express&#227;o mais alta tenha sido encontrada em um indiv&#237;duo com LC que apresentou falha terap&#234;utica&#44; a compara&#231;&#227;o entre os grupos n&#227;o mostrou diferen&#231;as&#46; &#201; poss&#237;vel que um tamanho de amostra maior&#44; bem como a avalia&#231;&#227;o de outros mediadores inflamat&#243;rios como IL&#8208; ou granzima&#44; possam contribuir para avaliar o perfil de T CD8<span class="elsevierStyleSup">&#43;</span> presente nas les&#245;es e fornecer uma correla&#231;&#227;o com o resultado terap&#234;utico com maior precis&#227;o&#46;</p><p id="par0095" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Um dado surpreendente foi a correla&#231;&#227;o entre a aus&#234;ncia de plasm&#243;citos na &#250;lcera antes do tratamento e a cura terap&#234;utica em dois meses em todos os indiv&#237;duos&#44; embora um paciente tenha apresentado recidiva entre dois e seis meses&#46; A presen&#231;a de plasm&#243;citos &#233; reconhecida como uma caracter&#237;stica importante do infiltrado inflamat&#243;rio na LC&#46; Entretanto&#44; o papel exato dos plasm&#243;citos na patog&#234;nese da LC ainda precisa ser determinado e provavelmente foi subestimado&#46; Ridley et al&#46; observaram uma correla&#231;&#227;o positiva significativa entre a presen&#231;a de necrose e a intensidade da infiltra&#231;&#227;o de plasm&#243;citos e linf&#243;citos&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180"><span class="elsevierStyleSup">17</span></a> Por outro lado&#44; bi&#243;psias de pele de les&#245;es de LC n&#227;o ulceradas ou at&#237;picas&#44; presumivelmente com uma rea&#231;&#227;o inflamat&#243;ria menor&#44; apresentaram tamb&#233;m uma quantidade menor de plasm&#243;citos&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">18</span></a> Um grande n&#250;mero de plasm&#243;citos est&#225; normalmente presente nos est&#225;gios finais da les&#227;o de LC&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0190"><span class="elsevierStyleSup">19</span></a> As limita&#231;&#245;es do estudo s&#227;o o baixo n&#250;mero de pacientes e a aus&#234;ncia da avalia&#231;&#227;o de outros marcadores da resposta imune <span class="elsevierStyleItalic">in situ</span>&#46;</p></span><span id="sec0075" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0115">Conclus&#227;o</span><p id="par0100" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Nossos dados sugerem um poss&#237;vel papel dos plasm&#243;citos na patologia da LC e como marcador de resultado terap&#234;utico&#44; uma vez que sua aus&#234;ncia no infiltrado foi associada &#224; cura em todos os casos&#44; com apenas uma recidiva&#46; Avalia&#231;&#227;o adicional de marcadores espec&#237;ficos para c&#233;lulas B e plasm&#243;citos em &#250;lceras de LC&#44; bem como estudos funcionais&#44; devem ser realizados para verificar seu potencial papel patog&#234;nico na LC&#46;</p></span><span id="sec0080" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0120">Suporte financeiro</span><p id="par0105" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Funaderm &#8211; Fundo de Apoio &#224; Dermatologia&#46;</p></span><span id="sec0085" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0125">Contribui&#231;&#227;o dos autores</span><p id="par0110" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Camila Sampaio Ribeiro&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; revis&#227;o cr&#237;tica da literatura&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o de dados&#59; participa&#231;&#227;o intelectual em conduta proped&#234;utica e&#47;ou terap&#234;utica dos casos estudados&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#59; elabora&#231;&#227;o e reda&#231;&#227;o do manuscrito&#46;</p><p id="par0115" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Riam Rocha Fran&#231;a&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o de dados&#59; elabora&#231;&#227;o e reda&#231;&#227;o do manuscrito&#59; an&#225;lise estat&#237;stica&#46;</p><p id="par0120" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Juliana Almeida Silva&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o de dados&#59; elabora&#231;&#227;o e reda&#231;&#227;o do manuscrito&#46;</p><p id="par0125" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Silvana Concei&#231;&#227;o da Silva&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o de dados&#59; elabora&#231;&#227;o e reda&#231;&#227;o do manuscrito&#46;</p><p id="par0155" class="elsevierStylePara elsevierViewall">S&#237;lvia R&#46;B&#46; Uliana&#58; Participa&#231;&#227;o intelectual em conduta proped&#234;utica e&#47;ou terap&#234;utica dos casos estudados&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o de dados&#46;</p><p id="par0130" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Viviane Sampaio Boaventura&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; revis&#227;o cr&#237;tica da literatura&#59; participa&#231;&#227;o efetiva na orienta&#231;&#227;o da pesquisa&#59; participa&#231;&#227;o intelectual em conduta proped&#234;utica e&#47;ou terap&#234;utica dos casos estudados&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#59; elabora&#231;&#227;o e reda&#231;&#227;o do manuscrito&#46;</p><p id="par0135" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Paulo R&#46; L&#46; Machado&#58; Aprova&#231;&#227;o da vers&#227;o final do manuscrito&#59; revis&#227;o cr&#237;tica da literatura&#59; obten&#231;&#227;o&#44; an&#225;lise e interpreta&#231;&#227;o de dados&#59; participa&#231;&#227;o efetiva na orienta&#231;&#227;o da pesquisa&#59; participa&#231;&#227;o intelectual em conduta proped&#234;utica e&#47;ou terap&#234;utica dos casos estudados&#59; revis&#227;o cr&#237;tica do manuscrito&#59; elabora&#231;&#227;o e reda&#231;&#227;o do manuscrito&#59; concep&#231;&#227;o e planejamento do estudo&#46;</p></span><span id="sec0090" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0130">Conflito de interesses</span><p id="par0140" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Nenhum&#46;</p></span><span id="sec0095" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0135">Agradecimentos</span><p id="par0145" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Agradecemos ao Dr&#46; Newton Sales Guimar&#227;es &#40;IPAC &#8208; Anatomia Patol&#243;gica e Citopatologia&#41; pelo apoio no processamento de bi&#243;psias de pele para an&#225;lise em H&#38;E&#46;</p><p id="par0150" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Agradecemos a Ana Maria da Silva Carvalho e Cristina dos Santos Vasconcelos Mota pela colabora&#231;&#227;o&#44; auxiliando na realiza&#231;&#227;o da imunomarca&#231;&#227;o das bi&#243;psias de pele&#46;</p></span></span>"
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                  \t\t\t\t">Taxa de cura em seis meses&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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Article information
ISSN: 26662752
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2024 October 210 79 289
2024 September 238 111 349
2024 August 214 143 357
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2024 May 151 71 222
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2024 March 221 90 311
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2021 November 72 86 158
2021 October 146 132 278
2021 September 68 81 149
2021 August 11 22 33
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